抗原修复方法及注意事项

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时间:2018-09-03

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1、柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)1.适用范围:适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复,其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠2.仪器设备:市售不锈钢家用压力锅,大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好);1000-1500W电炉一台;不锈钢或耐高温塑料切片架。3.所需试剂:0.01M柠檬酸型缓冲液,pH=6.0±0.14.操作步骤:(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后,浸泡于蒸馏水中待用。(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中,大火加热直至沸腾;将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上

2、,放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖,扣上压力阀,继续加热至喷汽,从喷汽开始计时,1-2分钟后,压力锅离开热源,冷却至室温(稍冷后,可在自来水笼头下加速冷却),取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次,每次3分钟(2×3')。(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。5.注意事项:(1)加热时间长短的控制很重要,从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好,时间过长可能会使染色背景加深。(2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架,不能使用铜架,以防缓冲液pH值增高而导致掉片。(3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后,才能把切片取出。(4)为防止组织脱落,

3、玻片必须经清洁处理后,涂覆Poly-L-Lysine((5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。EDTA抗原热修复法1.适用范围:适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复。2.仪器设备:电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染色架。3.所需试剂:EDTA抗原修复液,pH9.04.操作步骤:(1)抗原修复液的配制:根据所需工作液的量,取迈新公司产品MVS-0098适量,按1:50的比例稀释。(2)取500ml抗原修复工作液于1000ml不锈钢锅中,直接在电磁炉上加热至沸腾后,调低电磁炉功率使锅内修复液保持微沸状态。将组织切片置于耐高温染色架上,再将染色架缓

4、慢放入不锈钢锅中(注意:若快速将染色架丢进缓冲液中,往往会导致瞬时的激烈沸腾现象而造成组织脱落),之后加盖继续加热20分钟。再将不锈钢锅从电磁炉上移开,室温下自然冷却至室温后取出切片,蒸馏水洗1次3分钟,PBS洗2次、每次3分钟。之后进行免疫组化染色。5.注意事项:(1)由于修复液蒸发量无法估计,所以修复液不能重复使用。(2)工作液的量必须保证切片始终能浸泡在液体内。(3)为了防止加热过程组织脱片,须采用Poly-L-Lysine处理载玻片。(4)抗原修复后一定要等工作液冷却后,才能将切片从工作液中取出。柠檬酸缓冲液微波抗原修复法1.适用范围:适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗

5、原修复,其效果比高温高压修复差但比直接水煮好。2.仪器设备:微波炉(700-800w)。3.所需试剂:0.01M柠檬酸型缓冲液,pH=6.0±0.14.操作步骤:(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后,浸泡于蒸馏水中待用。(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(缓冲液量不得<500ml)于微波盒中,微波加热直至沸腾;将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中高档或中档继续微波处理15-20分钟;取出微波盒冷却至室温,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次,每次3分钟(2×3')。(3)按有关试剂盒的操作步骤执

6、行。5.注意事项:(1)微波时间长短的控制很重要,从组织切片放入沸腾的缓冲液到微波结束的总时间控制在15-20分钟为好。(2)必须使用耐高温塑料切片架,不能使用不锈钢或铜架。(3)微波过程中,如果缓冲液蒸发而量减少,无法浸泡到组织片,应该适当加上一些蒸馏水,以保证组织片都能浸泡在缓冲液中,继续微波。(4)微波结束后必须等缓冲液冷却后,才能把切片取出。(5)为防止组织脱落,玻片必须经清洁处理后,涂覆Poly-L-Lysine(Devil缓冲液的量(>500ml),必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法1.适用范围:适合于中性福尔马林固定、石蜡包埋

7、组织切片的抗原修复,其效果比高压修复法差。2.仪器设备:电炉(600W)、烧杯(1000ml)等。3.所需试剂:0.01M柠檬酸型缓冲液,pH=6.0±0.1)。4.操作步骤:(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后,浸泡于蒸馏水中待用。(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液于烧杯中,放在电炉上加热直至沸腾;将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,继续煮20分钟;烧杯离开火

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