石蜡切片中bcl┐6抗原失活机制及修复

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1、石蜡切片中BCL┐6抗原失活机制及修复　　摘要:目的探讨石蜡切片中BCL-6抗原失活机制及修复的最佳方法.方法淋巴组织反应性增生11例石蜡切片分别用二乙胺四乙酸（EDTA）、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种与钙离子结合力不同的修复液，结合高压、微波和煮沸3种不同方法修复后，比较检出的BCL-6阳性率及强度.结果BCL-6阳性率由高至低依次为:EDTA0.73>柠檬酸0.45（P<0.01）>碳酸钠0.12（P<0.01），去离子水组无1例阳性.高压修复阳性率0.55>微波修复0.28和煮沸修复

2、0.12（P<0.05）.不同修复液与高压结合修复检出BCL-6阳性率及强度:EDTA与柠檬酸阳性率分别为1，0.82（P>0.05），高于碳酸钠组（0.36）和去离子水组（0）（P<0.01）.EDTA组强阳性占0.82，显著高于其他各组（P<0.01）.结论EDTA结合高压是修复BCL-6抗原的理想方法，钙离子的参与可能是甲醛固定后BCL-6抗原失活的原因之一.　　Keymunohistochemistry;BCL-6;lymphoproliferation　　Abstract:AIMTos

3、tudytheidealmethodofretrievingtheantigenicactivityofBCL-6inparaffinsectionsandthe　possiblemechanismoftheantigenmasking.METHODSParaffin-embeddedsectionsfrom11casesoflymphoidreac-tivehyperplasia:ED-TA，citrate，sodiumcarbonate（SC）anddeionizedethods:highpressure（HP），

4、micromunohistochemistry.RESULTSThepositivepercentageinsectionsretrievedbyEDTA，citrateandSCongthegroupsentionedgroupsethodforretrievingantigenicactivityofBCL-6byformalin-fixa-tive，suggestingthatcalciummaybeinvolvedintheantigenmasking.　　0引言　　BCL-6是位于染色体3q27原癌基因bcl

5、-6编码的核内转录因子，由706个氨基酸组成，主要表达于淋巴组织生发中心B细胞及部分T细胞［1］.研究证实，bcl-6剔除鼠不能形成生发中心［2］，其基因调控区发生易位或（和）突变与B细胞淋巴瘤发生有关［3，4］，BCL-6表达失调可引起细胞凋亡及弥漫性大B细胞淋巴瘤发生［5，6］.检测BCL-6表达有助于淋巴瘤的诊断和鉴别诊断［7］.然而，40g・L-1甲醛固定后的BCL-6抗原不经修复极难检出.我们用免疫组化方法比较一组反应性增生淋巴组织石蜡切片，分别用EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复机制不

6、同的修复液，结合高压、微波及煮沸3种常用方法的修复效果，探讨BCL-6抗原失活机制及修复的理想方法.　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1标本及处理2000-02/2000-06收集西京医院病理科扁桃体炎标本7例，反应性增生淋巴结标本4例.经40g・L-1甲醛固定24h，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，切片置60℃烤箱过夜（切片用APES胶预处理）.　　1.1.2修复液及配制1mmol・L-1pH8.0ED-TA溶液:0.37gEDTA溶于1L蒸馏水，调pH值至8.0;10mmol&#

7、12539;L-1，pH6.0柠檬酸盐溶液、1.5mmol・L-1pH8.0碳酸钠溶液分别参照Cattoretti等［9］及Morgan等［8］的方法配制;去离子水用美国Millipore公司制纯水器生产.　　1.2方法高压修复参照Norton等［10］方法:1.5L修复液入压力锅中，加热至沸腾.将脱蜡至水切片置于金属架上，浸入锅内修复液中，盖压力锅阀，加热至压力锅喷气后1min，停止加热，冷水浸至室温.微波修复参照Cattoretti等［9］方法:将脱蜡至水切片放入盛有修复液的染缸中，置医用微波炉内中低

8、档加热10min，取出冷却至室温.煮沸修复法:将脱蜡至水切片浸入盛修复液的烧杯中，烧杯置于盛有自来水的铝锅内，电炉上加热，烧杯中温度达97℃后开始计时，15min后停止加热，冷至室温.　　1.3免疫组化检测及结果判断BCL-6mAb购自英国Novocastra公司，工作浓度1∶20.EnVisionTM及催化信号扩增（cataly