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时间:2018-11-20
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1、石蜡切片中BCL┐6抗原失活机制及修复论文.freelmunohistochemistry;BCL-6;lymphoproliferationAbstract:AIMTostudytheidealmethodofretrievingtheantigenicactivityofBCL-6inparaffinsectionsandthepossiblemechanismoftheantigenmasking.METHODSParaffin-embeddedsectionsfrom11casesoflymphoidreac-tivehyperplasia:ED-TA.freelcarbona
2、te(SC)anddeionizedethods:highpressure(HP),micromunohistochemistry.RESULTSThepositivepercentageinsectionsretrievedbyEDTA,citrateandSCongthegroupsentionedgroupsethodforretrievingantigenicactivityofBCL-6byformalin-fixa-tive,suggestingthatcalciummaybeinvolvedintheantigenmasking.0引言BCL-6是位于染色体3q27原癌基
3、因bcl-6编码的核内转录因子,由706个氨基酸组成,主要表达于淋巴组织生发中心B细胞及部分T细胞[1].研究证实,bcl-6剔除鼠不能形成生发中心[2],其基因调控区发生易位或(和)突变与B细胞淋巴瘤发生有关[3,4],BCL-6表达失调可引起细胞凋亡及弥漫性大B细胞淋巴瘤发生[5,6].检测BCL-6表达有助于淋巴瘤的诊断和鉴别诊断[7].然而,40gL-1甲醛固定后的BCL-6抗原不经修复极难检出.我们用免疫组化方法比较一组反应性增生淋巴组织石蜡切片,分别用EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复机制不同的修复液,结合高压、微波及煮沸3种常用方法的修复效果,探讨BCL-6抗原失
4、活机制及修复的理想方法.1材料和方法1.1材料1.1.1标本来源及处理2000-02/2000-06收集西京医院病理科扁桃体炎标本7例,反应性增生淋巴结标本4例.经40gL-1甲醛固定24h,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,切片置60℃烤箱过夜(切片用APES胶预处理).1.1.2修复液及配制1mmolL-1pH8.0ED-TA溶液:0.37gEDTA溶于1L蒸馏水,调pH值至8.0;10mmolL-1,pH6.0柠檬酸盐溶液、1.5mmolL-1pH8.0碳酸钠溶液分别参照Cattoretti等[9]及Morgan等[8]的方法配制;去离子水用美国Millipore公司制纯水器生产.
5、1.2方法高压修复参照Norton等[10]方法:1.5L修复液入压力锅中,加热至沸腾.将脱蜡至水切片置于金属架上,浸入锅内修复液中,盖压力锅阀,加热至压力锅喷气后1min,停止加热,冷水浸至室温.微波修复参照Cattoretti等[9]方法:将脱蜡至水切片放入盛有修复液的染缸中,置医用微波炉内中低档加热10min,取出冷却至室温.煮沸修复法:将脱蜡至水切片浸入盛修复液的烧杯中,烧杯置于盛有自来水的铝锅内,电炉上加热,烧杯中温度达97℃后开始计时,15min后停止加热,冷至室温.1.3免疫组化检测及结果判断BCL-6mAb购自英国Novocastra公司,工作浓度1∶20.EnVisi
6、onTM及催化信号扩增(catalyzedsignalamplification,CSA)免疫组化试剂盒购自Dako公司,按说明操作.11份标本各切片13张,分13组.其中一组不修复,用CSA试剂盒检测.另12组用不同的修复液及修复方法修复,运用DakoEnVisionTM两步法检测.TBS替代一抗作阴性对照.阳性强度评价采用半定量方法,阴性不着色(-),淡黄色为阳性(+),棕黄色颗粒或团块为强阳性()(着色部位位于胞核).统计学处理:实验结果采用χ2检验.2结果2.1未经修复组检测结果用CSA试剂盒检测未修复组,抗BCL-6免疫组化染色均为阴性(Fig1).2.2不同方法修复后BCL
7、┐6检测结果经EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复液,分别用高压、微波及煮沸3种修复方法处理后,EDTA组阳性率显著高于柠檬酸组(P0.01),后者又高于碳酸钠组和去离子水组(P0.01).3种修复方法比较,高压修复阳性率高于微波修复组(P0.05)和煮沸组(P0.01).且高压修复无组织脱片现象,其他修复方法均有不同程度的脱片(Tab1).图1-图2略表1不同方法修复后BCL-6检测结果略2.3高压配合不同修复液的修复效果EDTA或柠檬
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