石英微米晶粒电泳微柱的制备及其电泳分离论文

《石英微米晶粒电泳微柱的制备及其电泳分离论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、石英微米晶粒电泳微柱的制备及其电泳分离论文李连何友昭淦五二王晓葵谢海洋高勇【摘要】研究了内径2mm石英管填充均匀石英微米晶粒的电泳微柱制备及其电泳分离的可行性。石英微米晶粒用水热法合成。含30%甲醇的15mmol/LNa2HPO4为电泳缓冲液（pH115），对无需衍生的色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸进行了微柱电泳分离和紫外吸收检测。检出限分别为0038、021和020μmol/L；色氨酸的分离效率为44×104塔板数/m，电泳微柱的样品容量达到35μL,且有较好的分离重现性。对未填充石英微粒,填充平均粒度360μm石英砂和长9μm石

2、英微米晶粒的电泳微柱的热效应进行了讨论。实验结果表明，在电泳微柱中填充石英微米晶粒可抑制大柱径电泳的热效应，增大样品容量，提高检测灵敏度。此微柱电泳技术可作为现场、实时和便携式电动流动全分析系统的高效分离手段，适合大体积和低浓度样品分析。【关键词】微柱电泳，石英微米晶粒.freelicrocolumnanditsapplicationtotheelectrophoreticseparationofaminoacidsmI.D.fusedsilicamicrocolumnpackedquartzmicroncrystalpreparedb

3、yhydrothermalsynthesisarereported.illipore公司）；硅胶粉（上海麦纽内斯科技股份有限公司）；360μm石英砂（江苏连云港华成石英制品有限公司）。甲醇为色谱纯，其它化学试剂均为分析纯（上海化学试剂公司）。实验用水为三次蒸馏水（SZ3，上海沪西分析仪器厂）。色氨酸、苯丙氨酸与酪氨酸储备液浓度分别为125、500和500mmol/L，用蒸馏水稀释储备液制备混合标准溶液。分离缓冲液为15mmol/LNa2HPO4（pH115）+30%（V/V）甲醇。05mmol/L硫脲作电渗流标记物。电渗泵载

4、流为05mmol/L六亚甲基四胺（HMTA）水溶液，每次分析工作结束应将泵内载流更新。22石英微粒电泳微柱的制备将石英微粒依次用01mol/LHCl、蒸馏水和20mmol/LNaAc（pH30）填充缓冲液,清洗并浸泡6h。以01mol/LHCl、01mol/LNaOH和蒸馏水依次冲洗电泳微柱，60℃烘干。在分离柱与检测管间垫两层尼龙滤膜，避免石英微粒流失。将石英微粒和填充缓冲液的悬浮液缓慢注入分离柱，注入过程中轻轻敲击电泳柱；当整柱充满石英微粒后，在电渗流（500V）和轻敲电泳柱双重作用下，使柱内石英微粒进一步填充紧密均匀。

5、最后再用尼龙膜和05mm厚的尼龙过滤片封住分离柱上端。23石英微米晶粒的制备参照文献7中石英纳米晶粒的制备方法，石英微米晶粒用水热法在36cm3镍内衬的不锈钢高压釜中合成。18g硅胶粉加入27mL041mol/LKOH，10℃/min升温至350℃，恒温2h，将高压釜冷却至室温。产物用水和乙醇依次清洗，干燥。用X射线衍射仪（40kV，40mA）测定石英微米晶粒的晶态，放大2000倍电镜照片如图2所示，石英微米晶粒的平均尺寸为9μm×4μm。24微柱区带电泳的分离步骤分离前，标准溶液和缓冲溶液超声除气5min。电泳微柱用分离缓冲液

6、充分平衡。分离电压800V，用微量进样器将混合样品溶液通过聚醚醚酮接口定量注入于分离柱上端，3种氨基酸进行电泳分离，用分光光度计在216nm检测，计算机记录信号。分离间隙，电泳微柱用分离缓冲液电动冲洗5min。毫安表测量电泳电流。当电泳微柱的分离效率降至初始值的50%时，分离柱依次用01mol/LHCl、01mol/LNaOH及分离缓冲溶液电动冲洗。3结果与讨论31电泳微柱中的热效应考察未填充石英微粒,填充平均粒度360μm石英砂和长9μm石英微米晶粒电泳微柱的电流电场强度关系曲线，结果见图3。在相同场强下，图3曲线1的电流远大于

7、后两者，且增长更快。曲线1在10~60V/cm场强范围内，斜率明显增加。这表明未填充的电泳微柱中，热效应使缓冲液电导率增大，电流快速增加，热效应影响显著。曲线2表明随填充石英微粒的粒度增大，多孔率、热效应和电流曲线斜率变大，电流曲线偏离线性。但曲线3的场强升至120V/cm，电流曲线斜率基本保持恒定。实验表明，填充石英微米晶粒的电泳微柱可明显降低焦耳热。32电泳微柱中电场强度对电渗流的影响在微通道电泳中，电渗流速是影响电泳分离的重要参数，可用下式表示：veo=ε0εrζηE(1)式中，ε０为真空介电常数，εr为缓冲液相对介电常数，ζ为z

8、eta电势，η为缓冲液粘度系数，Ｅ为电场强度。为评价填充石英微米晶粒电泳微柱的热效应，以硫脲为电渗流标记物，研究场强对电渗流速的影响。根据式(1),其它条件不变,电渗流速与场强呈线性关系。但由