白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血损伤后血脑屏障的影响

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1、白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血损伤后血脑屏障的影响作者：彭雅滨，章翔，蒋晓帆，高大宽【关键词】白藜芦醇　　Influenceofresveratrolondamageofbloodbrainbarrierinpermanentfocalcerebralischemicinjuryinmice　　【Abstract】AIM:Todiscusstheinfluenceofresveratrolonthedamageofbloodbrainbarrier(BBB)inpermanentfocalcerebralischem

2、icinjuryinmice.METHODS:Ischemiainalpermanentmiddlecerebralarteryocclusion（MCAO）andEvansblueeasuredandtheexpressionofMMP9inishedtheextentandquantityofEvansblueextravasation［（101±15）mm3vs（149±17）mm3,(8.6±2.9)%vs(18.6±3.8)%,P<0.01］andinhibitedtheexpressionofMMP

3、9［(0.693±0.008)vs(1.537±0.037),P<0.01］.CONCLUSION:Resveratrol,duetoitsneuroprotectiveeffect,caninhibittheactivityofMMP9andalleviatethedisruptionofBBB.　　【Keyia;resveratrol;gelatinaseB;bloodbrainbarrier　　【摘要】目的：探讨白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血后血脑屏障损伤的影响.方法：采用线段血管内栓塞大脑中动脉(MCA

4、O)获得小鼠脑缺血模型,静脉注射Evansblue，观察白藜芦醇对缺血24h后脑组织中Evansblue外渗范围和含量的影响，同时应用RTPCR技术检测缺血脑组织中基质金属蛋白酶9（MMP9）的mRNA水平.结果：白藜芦醇减轻了Evansblue外渗范围［（101±15）mm3vs（149±17）mm3,P<0.01］和含量［(8.6±2.9)%vs(18.6±3.8)%,P<0.01］，并能够抑制MMP9的表达［(0.693±0.008)vs(1.537±0.037),P<0.01］.结论：白藜芦

5、醇可以抑制MMP9活性，减轻血脑屏障的损害，其神经保护作用与此有关.　　【关键词】脑缺血；白藜芦醇；明胶酶B；血脑屏障　　0引言　　白藜芦醇（Resveratrol）是一类主要存在于葡萄、藜芦、虎杖等植物中的多酚类化合物,具有抗氧化、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗肿瘤等生物学活性［1，2］.脑缺血损伤后，白藜芦醇可以通过对自由基、一氧化氮（NO）及炎性因子的调节发挥作用［3-5］；可以减小脑缺血后梗死灶体积,减轻缺血后的损伤反应［6］.因此，白藜芦醇神经保护性作用的研究已经成为近年来神经科学领域里的一个热点.

6、我们观察了白藜芦醇对脑缺血性损伤后血脑屏障的影响，同时检测了白藜芦醇对基质金属蛋白酶9(matrixmetalloprotEinase9,MMP9)表达的调节.　　1材料和方法　　1.1材料　　健康成年雄性昆明小鼠40只，体质量（20±2）g，由第四军医大学实验动物中心提供；Evansblue和白藜芦醇由美国Sigma公司提供.　　1.2方法　　1.2.1动物分组及模型制作昆明小鼠随机等分为Evansblue测量组和MMP9测量组，各组再等分为白藜芦醇治疗组和单纯缺血对照组，每组10只.白藜芦醇按30mg/(kg&#

7、12539;d)剂量强饲预治疗，共7d.小鼠经2g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉后（50mg/kg），正中切开颈部皮肤，经颈总动脉插入80尼龙纤维线段永久栓塞大脑中动脉［7］.栓塞成功后，经左侧股静脉注射Evansblue.术后置于32℃保温箱中3h,自由喂养.　　1.2.2Evansblue外渗范围和含量的测定缺血后24h，小鼠断头取脑，并切成2mm厚的冠状脑片，计算机辅助图像分析系统下测定Evansblue外渗的面积，将各脑切片的外渗面积乘以2mm再相加即为整个外渗区域的体积.将脑片从中线分开，左右半球的脑片各置于1.5

8、mL离心管中.加入1mL0.1mol/LPBS，用次声匀浆器将脑组织制成匀浆，在1000g下离心15min；取0.7mL三氯醋酸加入等量上清液中，4℃下共育18h，离心30min，取上清液1mL，用分光光度仪在610nm波长条件下，通过与标准Evansblue液的比较来测定脑组织中Evansblue的含量.　　1.2.3MMP9的检测（RTPC