白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血损伤后血脑屏障的影响论文

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1、白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血损伤后血脑屏障的影响论文彭雅滨，章翔，蒋晓帆，高大宽【关键词】白藜芦醇Influenceofresveratrolondamageofbloodbrainbarrierinpermanentfocalcerebralischemicinjuryinmice【Abstract】AIM:Todiscusstheinfluenceofresveratrolonthedamageofbloodbrainbarrier(BBB)inpermanentfocalcerebralischemicinjuryinmice.METHODS:Ischem

2、iainalpermanentmiddlecerebralarteryocclusion（MCAO）andEvansblueeasuredandtheexpressionofMMP9inishedtheextentandquantityofEvansblueextravasation［（101±15）mm3vs（149±17）mm3,(8.6±2.9)%vs(18.6±3.8)%,P0.01］andinhibitedtheexpressionofMMP9［(0.693±0.008)vs(1.537±0.037),P0.01］.CONCLUSION:Resverat

3、rol,duetoitsneuroprotectiveeffect,caninhibittheactivityofMMP9andalleviatethedisruptionofBBB.【Keyia;resveratrol;gelatinaseB;bloodbrainbarrier【摘要】目的：探讨白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血后血脑屏障损伤的影响.方法：采用线段血管内栓塞大脑中动脉(MCAO)获得小鼠脑缺血模型,静脉注射Evansblue，观察白藜芦醇对缺血24h后脑组织中Evansblue外渗范围和含量的影响，同时应用RTPCR技术检测缺血脑组织中基质金属蛋白酶

4、9（MMP9）的mRNA水平.结果：白藜芦醇减轻了Evansblue外渗范围［（101±15）mm3vs（149±17）mm3,P0.01］和含量［(8.6±2.9)%vs(18.6±3.8)%,P0.01］，并能够抑制MMP9的表达［(0.693±0.008)vs(1.537±0.037),P0.01］.结论：白藜芦醇可以抑制MMP9活性，减轻血脑屏障的损害.freelatrixmetalloproteinase9,MMP9)表达的调节.1材料和方法1.1材料健康成年雄性昆明小鼠40只，体质量（20±2）g，由第四军医大学实验动物中心提供；Evansblue和白

5、藜芦醇由美国Sigma公司提供.1.2方法1.2.1动物分组及模型制作昆明小鼠随机等分为Evansblue测量组和MMP9测量组，各组再等分为白藜芦醇治疗组和单纯缺血对照组，每组10只.白藜芦醇按30mg/(kgd)剂量强饲预治疗，共7d.小鼠经2g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉后（50mg/kg），正中切开颈部皮肤，经颈总动脉插入80尼龙纤维线段永久栓塞大脑中动脉［7］.栓塞成功后，经左侧股静脉注射Evansblue.术后置于32℃保温箱中3h,.freelm厚的冠状脑片，计算机辅助图像分析系统下测定Evansblue外渗的面积，将各脑切片的外渗面积乘以2mm再相加即为

6、整个外渗区域的体积.将脑片从中线分开，左右半球的脑片各置于1.5mL离心管中.加入1mL0.1mol/LPBS，用次声匀浆器将脑组织制成匀浆，在1000g下离心15min；取0.7mL三氯醋酸加入等量上清液中，4℃下共育18h，离心30min，取上清液1mL，用分光光度仪在610nm波长条件下，通过与标准Evansblue液的比较来测定脑组织中Evansblue的含量.1.2.3MMP9的检测（RTPCR）①提取总RNA：将缺血24h后的小鼠在深度麻醉下断头取脑，缺血侧半球装入1.5mL离心管中，迅速冷凝，置于-88℃冰箱中保存备用.按照ISOGENLSRNA快速

7、提取试剂盒（日本富山基因公司）说明提取总RNA.②反转录合成cDNA：依照SuperScriptTM反转录第一链合成试剂盒（美国Invitrogen公司）的说明进行.③引物合成：MMP9的特异性引物由上海博亚生物工程公司合成，其寡核苷酸引物序列为:5′CTGTATGGCTTCTGCCCTACCCGAGTGGAC3′.④RTPCR扩增：在50μL反应体积中加入0.2μg合成的cDNA,5μL10×的PCR缓冲液、5μL1mmol/LMgSO4,15pmol的引物，16.67nkat的KODPlusDNA聚合酶.使用PTC100PCR仪进行热循环.取10μLPCR产物

8、，经30g