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《血竭乳剂对糖尿病小鼠肝脏和肌肉组织中糖原合成酶激酶表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、血竭乳剂对糖尿病小鼠肝脏和肌肉组织中糖原合成酶激酶表达的影响论文.freelellitus,DM)小鼠在接受中药血竭乳剂治疗后肝脏及右后肢肌肉组织匀浆中糖原含量及糖原合成酶激酶(GSK-3β)的表达。方法将120只昆明小鼠分为6组,A组为正常对照组,B组为DM模型组,C、D、E组分别为血竭乳剂低、中、高剂量用药组,F组为盐酸二甲双胍用药组。C、D、E组小鼠分别按125、250、500mg/(kg·d)剂量血竭乳剂灌胃,B组用等体积生理盐水灌胃,F组小鼠按100mg/(kg·d)溶于等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续给药7d。结果在给予血竭乳剂后,.free
2、leofhepaticglycogenandmuscleglycogenintheliverandmuscleofmiceiceofKunmingstrain,andrandomlydividingthemintosixgroups：normalgroup,DMgroup,Dragon’sbloodgroupsg/(kg·d)andC4H11N5·HClgroup.Dragon’sbloodgroupsg/(kg·d)byintrogastric(ig)everydayfor7d.Theindiceseofhepaticglycogenandmuscleg
3、lycogenofmiceice血竭为棕榈科植物麒麟竭果实及树干中的树脂,原植物有百合科的龙血树属、棕榈科的黄藤属、大戟科的巴豆属和豆科的紫檀属中的10余种植物。本实验以糖尿病(DM)小鼠空腹血糖、肝脏和肌肉组织匀浆中糖原含量及糖原合成酶激酶(GSK-3β)表达为检测指标,揭示血竭乳剂降糖作用的机理。1实验材料1.1动物健康远交系昆明小鼠120只,清洁级,辽宁中医药大学实验动物中心提供,许可证号：SCX(辽)2004-0018,雌雄各半,体重(28±4)g,鼠龄6周。1.2主要药物、试剂血竭乳剂(沈阳药科大学药剂教研室,批号20060726)；盐酸二甲双胍
4、(江苏正大天晴药业股份有限公司,批号060411)；四氧嘧啶(美国Fluka公司,批号426090/151502)；MouseAnti-GSK-3β(北京赛驰生物科技有限公司)；即用型SABC(StreptAvidin-Biotinplex)；免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；肝、肌糖原试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20060216)。1.3主要仪器显微照像系统(C7070/B41OLYMPUS)、ACCU-CHEX罗康全血糖仪及活力型血糖试纸,罗氏诊断产品有限公司产品；DYY-6C型电泳仪及垂直板电泳槽及转印仪,北
5、京六一仪器厂产品；722型光栅分光光度计,上海第三分析仪器厂产品。2实验方法2.1分组将小鼠随机分为6组,即正常对照组(A组)、DM模型组(B组)、血竭乳剂低、中、高剂量组(C、D、E组)以及盐酸二甲双胍组(F组),每组20只。分笼饲养,自由饮水,A组饲料为标准颗粒饲料,B～F组饲料为高糖、高脂饲料(按猪油30%、白砂糖10%、胆固醇3%的比例加入正常饲料中,按能量计算蛋白质、脂肪、碳水化合物所占比例分别为8.3%、59.3%、32.4%)。2.2造模诱发性糖尿病动物模型。于通风(换气量10～20次/h)、安静、清洁、温度为(25±2)℃、相对湿度为50%
6、～60%、光照时间6：00－18：00的室内,实验小鼠在代谢笼中适应性饲养1周,记录体重、饮水量及随机血糖等。B～F组将四氧嘧啶以注射用生理盐水新鲜配制成1.5%的溶液,空腹12h后按四氧嘧啶250mg/kg体重1次腹腔内注射。断尾采血1检测,24h后出现血糖值升高,≥11.0mmol/L,持续2周以上,提示造模成功。自然喂养1周,造模未成或意外死亡小鼠除外。A组空腹12h后用生理盐水按等体积1次腹腔内注射,2周后参与对照。2.3给药造模成功后,C、D、E组按125、250、500mg/(kg·d)小鼠体重给予血竭乳剂灌胃2,B组给予生理盐水等体积灌胃,F
7、组按100mg/(kg·d)溶于等体积生理盐水中灌胃。1次/d,连续给药7d。2.4体重、空腹血糖及肝、肌糖原检测定期称量小鼠体重；断尾取血1测量空腹血糖；肝、肌糖原检测方法按试剂盒说明操作。2.5取材方法各组于用药7d后按雌雄随机取10只,禁食4h,不禁水,断头处死。沿腹白线正中切开皮肤,用镊子夹住门静脉的根部,用预冷剪刀切断血管和韧带,迅速摘取肝脏,剥离右后肢肌肉,分别用冷生理盐水冲洗2次后滤纸吸干,速冻于液氮中保存,然后转入-70℃冰箱待检。2.6ouseAnti-GSK-3β,4℃过夜。PBS(pH7.6)洗2min×3次。滴加生物素化山羊抗小鼠I
8、gG,37℃30min。PBS(pH7.6)洗2min(3次)。滴
