小柴胡汤诱导内异症异位内膜细胞凋亡的研究论文

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1、小柴胡汤诱导内异症异位内膜细胞凋亡的研究论文尹龙萍邓毅姚雷赵爱华贾伟【关键词】小柴胡汤；,,内异症；,,异位内膜细胞凋亡摘要：目的探讨小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜细胞凋亡的影响。方法建立大鼠内异症模型，采用透射电镜技术及免疫组化方法，观察小柴胡汤对异位内膜细胞形态结构和Fas及Caspase-3蛋白表达的影响。结果中、高剂量小柴胡汤（10，15gkg-1d-1）治疗后，异位内膜有较多腺上皮细胞出现凋亡的特征，表现为细胞体积变小，核固缩，胞浆和核染色质凝集.freeletriumcellapoptosisinrats.MethodsUsingt

2、heratmodel,ectopicendometriumicroscope.FasandCaspase-3proteinexpressionintheendometriumandendometriotictissuemunohistochemicalmethod.ResultsTheglandularcellintheendometrialimplantaftertherapyiddleorhigh-doseof(10，15gkg-1d-1)XiaoChaiHuDecoctionshoicandnuclearchromatincondens

3、ation,densityincreasedandalotofapoptoticbodiesamongcell.ARKER公司；链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒，北京中山生物技术公司。1.3仪器JEOL-100CXII/T透射电子显微镜，日本电气公司；AO-820切片机，美国生物仪器公司；TIGER细胞图像分析仪，重庆大学泰格尔图像工程技术研究所。2方法2.1内异症大鼠模型的复制参考Jones［3］方法建模。实验中60只大鼠共49只建模成功。2.2分组与给药分为5组，即小柴胡汤低、中、高剂量组、丹那唑组及对照组。小柴胡汤低、

4、中、高剂量组分别给予5，10，15g/kg小柴胡汤；丹那唑组给予0.1g/kg丹那唑；对照组给予蒸馏水。各组大鼠注入药物溶液体积均为20ml/kg，灌胃给药1次/d，连续4周。2.3电镜观察给药4周后取材，标本经多聚甲醛-戊二醛固定液前固定2h后，再经1%锇酸作后固定2h，酒精、丙酮梯度脱水，Epon812渗透包埋，超薄切片机切片，铀铅双重染色，透射电镜观察。2.4免疫组化法分析Fas及Caspase-3蛋白的表达按SP法染色。参照毛熙光等［4］方法，计算蛋白表达评分。2.5统计学处理使用SPSS10.0统计软件，对同一组大鼠在位内膜、异位内

5、膜的综合评分结果进行两相关样本秩和检验，反映同一药物对在位内膜、异位内膜作用间的差异。3结果3.1小柴胡汤对异位内膜细胞形态结构的影响电镜下，小柴胡汤中、高剂量组和丹那唑组均可见腺上皮细胞和间质细胞的凋亡和坏死现象。小柴胡汤中、高剂量组以凋亡现象为多见，散在分布，表现为细胞收缩，细胞体积变小，核固缩、碎裂，胞浆凝集，染色质边集，胞膜和核膜完整，个别细胞间可见凋亡小体，同时也可见一些间质细胞的坏死。丹那唑组以坏死细胞居多，较集中呈点片状，主要存在于腺上皮，坏死细胞中的细胞器明显呈空泡状变性，间质细胞中可见一些凋亡早期细胞，表现为核膜完整，核周腔

6、扩张，核质边集的现象。对照组中凋亡和坏死现象均较少发现。3.2小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜Fas,Caspase-3蛋白表达的影响Fas蛋白主要表达于各组在位、异位内膜的腺上皮细胞，大多在胞浆和胞膜表达，个别细胞呈全细胞表达；Caspase-3蛋白在各组在位、异位内膜的腺上皮细胞和基质细胞的胞浆中表达。结果见表1。表1小柴胡汤对异位内膜Fas，Caspase-3蛋白表达水平的影响（略）与在位内膜比较，*P＜0.05，△P＜0.014讨论本实验发现，小柴胡汤中、高剂量组异位内膜中有较多的腺上皮细胞凋亡，个别基质细胞坏死现象，丹那唑组中则以腺细胞

7、坏死为主，细胞凋亡主要发生在间质细胞中。可见药物对不同细胞的影响并不单纯决定于药物本身的作用，可能还与不同细胞对药物所引起的局部内环境改变的反应和识别有关。丹那唑是17α乙炔睾丸酮的衍生物，它通过作用于下丘脑－垂体－卵巢轴的各个部位而抑制卵巢功能，引起在位与异位内膜萎缩。在间质细胞与腺细胞中，雌激素受体和孕激素受体表达水平不同，针对激素水平的变化所做出的反应也就不尽相同，小柴胡汤可能是通过改变微环境的免疫状态和功能，促进凋亡失调控，凋亡水平表现低下的细胞凋亡率增加［5］，使机体正常的免疫清除得以实现，达到预防和治疗的作用。正常子宫内膜，从增生

8、期到分泌期，FasmRNA及蛋白表达强度均呈明显上升趋势［6］，而Fas在内异症患者的在位及异位内膜中的表达均较低，使得在位及异位内膜始终保持一种低水平的凋亡状态，