黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究

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1、黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究作者：王海彬，王军舰，黄辉，刘琳，刘少军，徐传毅，何伟，樊粤光，黄志伟【关键词】黄芪注射液；,,基因报告系统；,,雌激素受体；,,HeLa细胞；,,配体结合域　　摘要：目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统，研究黄芪注射液对雌激素受体（ER）活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域，将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与雌激素受体的关系；MTT法检测黄芪注射液对细胞活力的影响。结果成功构建含有

2、雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统，黄芪注射液不能提高细胞活性，但对雌激素受体具有激活作用。结论黄芪注射液可能通过雌激素受体发挥疗效，细胞杂交基因报告系统是研究中药作用机理的手段之一。　　关键词：黄芪注射液；基因报告系统；雌激素受体；HeLa细胞；配体结合域　　ActivatingEffectofAstragalusInjectiononEstrogenReceptor　　Abstract:ObjectiveToestablishtheGal4DBD-ERorERLBDreportsyst

3、emtostudytheeffectofAstragalusInjectiononERs.MethodsGenereportsystemplifyingtheligandbindingdomain(LBD)eraseandsubcloningtheproductintotheeukaryoticexpressionvectorpCMVBD.ThissystemployedtostudytherelationshipbetusingER-LBDisestablished.AstragalusInjectio

4、ncannotimprovecellactivitybutcanactivateERsactivation.ConclusionThemechanismsofAstragalusInjectionmayberelatedtoitseffectofactivatingERs.GenereportsystemcanbeusedtostudythemechanismsofChinesetraditionalmedicine.　　Key；Estrogenreceptor；HeLacell；Ligandbindin

5、gdomain　　雌激素受体（Estrogenreceptor,ER）是一个核转录因子,属甾体激素受体家族成员，调控基因表达。ER在1967年被首次发现［1］，20多年来,它作为内分泌治疗的预测因子被广泛应用。1996年ERα首次从大鼠中克隆［2］，其后人和小鼠也相继发现ERβ的表达［3，4］。ERα和ERβ的结构、功能存在差异,在乳腺癌的发生发展中发挥不同作用［5］。因而研究药物对雌激素受体的作用，将有利于我们认识药物的作用机理。黄芪主要有补气的作用,在临床上主要治疗以气虚为主证的疾病，在处方中多以君药

6、出现,具有补中益气、补气升阳、益卫固表的作用。为了进一步探讨其作用机理，本研究采用哺乳动物细胞杂交技术研究黄芪注射液对雌激素受体配体结合域的作用，探讨黄芪对雌激素受体的部分作用。　　1材料与方法　　1.1材料Hela细胞由中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿研究员赠送；DMEM无血清、无酚红培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素购自Hyclone公司；Lipofactemine2000购自Invitrogen公司；SteadyGlo荧光检测试剂盒购自Promega公司；细胞培养板均购自CorningCost

7、ar公司；MTT购自Molecular公司；黄芪注射液(上海禾丰药业)。　　1.2PCR扩增hERa-LBDcDNA　　根据genebank报道的ERs序列（M12674和NM001437），设计hERa-LBD和hERb-LBDcDNA序列的引物,在5’端引入一个BamHⅠ的酶切位点,在hERa-LBD的3’端引入一个EcoRⅠ的酶切位点，在hERb-LBD的3’端引入一个HindⅢ的酶切位点，引物序列如下。上游5’GCGGATCCGGAGGGAGAATGTTGAAAC3’下游　5’GCGAATTCTC

8、AGACTGTGGCAGGGAAAC3’；HumanERβLBD引物序列：上游5’GCGGATCCGGCAAGGCCAAGAGAAGTG3’下游5’　GCAAGCTTTCACTGAGACTGTGGGTTC3’。以cmxp-ERa和cmxp-ERb全长cDNA质粒为模板进行PCR反应。反应程序为：94℃,5min；94℃，1min；55℃，1min；72℃，2min；72℃，7min循环20次；PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,