通腑法开通玄府对大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障及脑组织水通道蛋白4 mrna的影响

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1、通腑法开通玄府对大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障及脑组织水通道蛋白4mRNA的影响作者：胡建芳，余志辉，汪峰，黄培新，尤劲松【摘要】　　目的研究通腑醒神胶囊（简称TFXSJN）通腑法开通玄府对大鼠大脑中动脉阻塞（middlecerebralarteryocclusion，简称MCAO）再灌注损伤模型血脑屏障（bloodbrainbarrier，简称BBB）通透性及脑组织水通道蛋白4（Aquaporin-4，简称AQP4）mRNA表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠MCAO模型,2h后拔线造成缺血再灌注损伤。大鼠处死前2h经股静脉注射伊文思蓝（EvansBl

2、ue，简称EB）并测量各组大鼠1，3d及7d时脑EB含量，以及拔线后12h，1，2，3d及7d时间点大鼠神经行为评分、脑组织AQP4mRNA的表达水平。结果TFXSJN治疗后能明显减轻大鼠在1，2，3d及7d时的神经功能评分，与模型组相比有明显差异（P<0.05或P<0.01）；造模后TFXSJN组、模型组脑EB含量在1，3，7d时均明显高于假手术组（P＜0.05），1d时开始升高，3d时达高峰，7d时有所下降，但仍高于正常，其中3d时TFXSJN组EB含量明显低于模型组（P＜0.05），1，7d时TFXSJN组EB含量均数亦低于模型组，

3、但无统计学意义（P>0.05）；TFXSJN组及模型组大鼠脑组织损伤侧AQP4mRNA的表达在12h时已经明显升高，与健侧、假手术组及正常组相比均具有显著性差异（P<0.01）；模型组在3d时达高峰，TFXSJN组在2d时达高峰，3d时已有所下降，与模型组损伤侧相比有明显差异（P<0.05），但仍高于健侧（P<0.05）。7d时两组损伤侧的AQP4mRNA表达水平基本恢复正常，与健侧、假手术及正常组相比无明显差异（P>0.05）。假手术组在各时点内其损伤侧AQP4mRNA表达水平与健侧及正常组相比均无明显差异（P>

4、0.05）。结论脑急性缺血再灌注损伤时存在BBB通透性的增高和AQP4mRNA基因表达的上调。而TFXSJN通腑法开通玄府法能够调节缺血再灌注损伤后BBB通透性增高与AQP4mRNA表达的失衡，减轻缺血再灌注损伤，从而起到神经保护作用。其调节BBB通透性与AQP4mRNA基因的异常表达可能是通腑法开通玄府治疗缺血性中风的分子机制之一。因此推测玄府与BBB及细胞膜上通道蛋白（如AQP4等）之间可能存在共同的实质内涵。【关键词】腑法开通玄府缺血再灌注损伤血脑屏障脑组织水通道蛋白4中医认为中风病存在玄府郁闭的病理状态，通腑法的目的在于开通玄府，调节玄府功能

5、。而对于玄府本质的认识，现代医家认为玄府是机体内最微小的腔道，在结构及功能上体现了“孔”“缝隙”的内涵实质，与现代医学的细胞间隙十分相似，与微循环、离子通道有着许多共性内涵［1,2］。因此，本实验旨在研究TFXSJN通腑法开通玄府对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型的治疗作用及其对BBB通透性和神经细胞膜上AQP4mRNA基因表达的影响，试图从调节BBB通透性及细胞膜上通道蛋白表达的异常来诠释通腑法开通玄府治疗急性缺血性中风的可能作用机制，探讨通腑法开通玄府与BBB及神经细胞膜上通道蛋白之间的相关性，有助于从现代科学的微观指标解释通腑法的实质内涵，为

6、中风病的现代化研究及中西结合找到切入点和开拓新思路。　　1材料与仪器　　1.1动物及药物SPF级雄性SD大鼠，体重250～300g，由广州中医药大学动物实验中心提供（合格证编号：0014930）。TFXSJN由广东省中医院制剂科提供（由番泻叶、虎杖、人工牛黄、天竺黄、栝蒌仁等药物组成）。　　1.2材料及试剂TRIZOL(美国sigma公司产品)、DEPC(美国sigma公司产品)、玻璃匀浆器、1.5mlEppendorf管、氯仿、异丙醇、无水乙醇、2％伊文思蓝、甲酰胺、超低温离心机(BECKMANQS-15RCentrifuge)、螺旋振荡器、－70

7、℃冰箱、紫外分光光度计(Ultrospec4000)、1.5%琼脂糖凝胶、SSIII逆转录试剂盒(Invitrogen公司产品)、PCR扩增试剂盒(北京天为时代公司产品)、AQP-4上、下游引物及探针（序列参考相关　　3结果　　3.1各组大鼠在不同时间点神经功能评分比较根据评分标准，清醒后予以评分，评分在1～4分的大鼠为纳入对象。结果表明假手术组大鼠在各个时点均未出现明显的神经功能缺损症状。TFXSJN组及模型组大鼠在拔线时的神经功能缺损评分无明显差异（P>0.05）。而1，2，3d及7d时TFXSJN组大鼠的神经功能缺损评分明显低于对照组（P

8、<0.05或P<0.01）。结果见表1。表1两组大鼠在不同时点神经功能缺损评分比较（略）　　3.