c反应蛋白与肾小管间质纤维化关系研究

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1、C反应蛋白与肾小管间质纤维化关系研究作者：李灿，金英顺，陈瑛，梁哲宇［摘要］［目的］探讨C反应蛋白（CRP）与慢性环孢素A（CsA）肾毒性肾小管间质纤维化的关系.［方法］给雄性Sprague-Daodelofchroniccyclosporine（CsA）nephrotoxicity.METHODSChronicCsAnephrotoxicityinisteringCsAfor4CRP，highsensitivity-CRP（hs-CRP），andintrarenalCRPofratsincontrolgroupandCsAtreatmentgroupmu

2、noturbidometricmethodandimmunohistochemistry.TIFeasuredbyMassontrichromestain.TherelationshipbetCRPandTIF，intrarenalCRPexpressionarkedlyincreasedinCsA-treatedratkidneysparedCRPiscloselyassociatedier，Madison，L/kg橄榄油（Sigma），给慢性CsA肾毒性组大鼠每日皮下注射15mg/kgCsA（NovartisPharma，Basel，瑞士），时间为4周

3、.1.2肾功能测定将大鼠放入代谢笼中，采血，收集24h尿液，用7150型全自动生物化学分析仪测定血清肌酐（Scr）含量，用Jaffe比色法测定24h尿肌酐含量，用下列公式计算内生肌酐清除率（creatiniceclearance，Ccr）:Ccr（%）=24h尿量×尿肌酐血清肌酐×1001.3血清CRP含量的测定采用胶乳增强免疫比浊法检测血清hs-CRP，CRP含量［5］.由韩国天主教大学江南玛丽医院梁哲宇教授提供原始数据.1.4肾脏病理检查用碘酸-赖氨酸-多聚甲醛液（periodate-lysine-paraformaldehyde，PLP）固定大鼠肾组

4、织，石蜡包埋后切片，厚度为4μm，脱蜡，行三色染色.肾小管间质纤维化程度判定:每张切片至少观察20个非重叠区域，用数字显微镜分析仪（Olympus，日本）以每个视野为100%利用Polygon程序计算出纤维化百分率，并计算其平均值.1.5免疫组织化学染色将石蜡包埋的切片置于二甲苯脱蜡，梯度酒精中脱水，在室温下经3g/L过氧化氢及100g/L甲醛处理30min，用PBS洗涤3次，置于微波炉中加热5min（抗原修复），用PBS洗涤3次，室温下滴加非免疫性血清封闭液处理20min，用PBS洗涤3次，在4℃条件下滴加一抗（ED-1，Sigma，美国），在室温孵育1

5、2～16h，用PBS液洗涤3次，滴加二抗，继续孵育2～3h，以DAB为底物显色至颜色呈棕黄色为止;自来水流水洗涤，复染苏木素，常规树脂封片，用数字显微镜分析仪计数ED-1，CRP阳性细胞数.1.6统计学处理计量资料用均数±标准偏差表示（x±SD），两样本均数间比较采用t检验.CRP含量与肾小管间质纤维化程度的关系的分析用直线相关分析，采用SPSS12.0软件进行.2结果慢性CsA肾毒性组大鼠肾功能明显降低，表现为Scr为（109.3±11.7）μmol/L，与对照组大鼠的（57.1±1.9）μmol/L相比明显上升，Ccr为（1.5±0.2）mL}

6、39;min-1・kg-1，与对照组大鼠的（5.1±0.6）mL・min-1・kg-1相比明显下降，两组Scr，Ccr值间均有显著性差异（P<0.01）.慢性CsA肾毒性组大鼠肾组织肾小管间质纤维化百分率为36%±3%，而对照组大鼠则无肾小管间质纤维化（图1）;慢性CsA肾毒性组大鼠肾小管间质内可观察到大量的ED-1阳性细胞浸润（54个±9个），与对照组（11个±1个）比较有显著性差异（P<0.01，图2）;对照组及慢性CsA肾毒性组大鼠血清CRP含量分别为（21.6±1.14），（21.6±1.13）

7、mg/L，Hs-CRP含量分别为（2.4±0.09），（2.5±0.19）mg/L，两组间无显著性差异（P>0.05）;免疫组织化学染色结果表明，慢性CsA肾毒性组大鼠肾内CRP表达及免疫活性明显增强，CRP阳性细胞数为（62±6）个，集中于受损区域的肾小管上皮细胞，对照组为（24±2）个，两组间有显著性差异（P<0.01，图3）.直线相关分析结果表明，血清CRP，hs-CRP含量与肾小管间质纤维化程度无相关关系（r=0.054，P=0.844;r=0.027，P=0.919），而肾内CRP阳性细胞数与肾小管间质纤维化程度有较强的正相关关系（r

8、=0.862，P<0.001）.图1三色染色所示对照组及慢性