ox42和fos蛋白在海人酸致癫大鼠前脑中早期的表达变化

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1、OX42和Fos蛋白在海人酸致癫大鼠前脑中早期的表达变化　　2.2OX42阳性细胞在前脑分布及表达的时间规律　　2.2.1OX42阳性细胞在前脑分布的区域对照组大鼠在前脑内可见有少量OX42阳性细胞散在分布，阳性细胞的胞体小，突起多而细，呈静息型；KA导致癫痫发作后OX42阳性细胞数量明显增加，细胞由静息型转变为激活型，其特点是OX42染色深，胞体变大，突起变长粗，在前脑主要集中分布在大脑皮层（包括扣带回、额叶、顶叶和颞叶）（图1A），在海马各亚区主要分布在分子层和多形层（包括CA1，CA2，CA3，CA4和齿状回），锥体细胞层和颗粒细胞层阳性细胞很少（图1B）和杏仁核簇（图1

2、C），OX42阳性细胞的分布没有明显变化.　　A:OX42在大脑皮层的分布×240；B:OX42在海马CA3区的分布×120；C:OX42在杏仁核的分布×120.　　图1海人酸致癫发作120min后OX42阳性细胞的分布（葡萄糖ＤＡＢ硫酸镍铵法）（略）　　2.2.2OX42阳性表达的时间规律结果显示，癫痫发作后15min组可以见到少量OX42阳性细胞，阳性细胞的胞体小，突起多而细，呈静息型；30min组阳性细胞数量较10min组增多；60min组阳性细胞数量较30min组增多，胞体增大，突起变短，向激活型转变；120min组阳性细胞数量进一步增多，细胞体积更大，突起少而粗

3、大，阳性细胞无论在数量还是在体积上均达到高峰，细胞呈激活型；至360min时，阳性细胞数量及形态与120min组相似，仍为激活型.　　2.3Fos阳性神经元在前脑分布及表达的时间规律　　2.3.1Fos阳性神经元在前脑分布的区域用硫酸镍铵加强的免疫组织化学显色结果为蓝黑色，Fos免疫阳性物质位于细胞胞核内，神经元、星形胶质细胞及小胶质细胞均可能表达Fos蛋白.因小胶质细胞的胞核很小，在未与OX42双重标记的单标切片中难于辨认，且与星形胶质细胞表达的Fos阳性胞核无法区别.对照组大鼠在前脑内未见Fos阳性细胞；KA导致癫痫发作后Fos阳性细胞数量明显增加，在前脑主要集中分布在大脑皮层（包括

4、扣带回、额叶、顶叶和颞叶）（图2A）、海马和杏仁核簇（图2B）.　　A:Fos蛋白在大脑皮层的分布×24；B：Fos蛋白在杏仁核的分布×60.　　图2海人酸致癫发作120min后Fos阳性神经元的分布（葡萄糖ＤＡＢ硫酸镍铵法）（略）　　2.3.2Fos阳性神经元表达的时间规律观察结果显示，癫痫发作后15min组未见Fos阳性细胞；30min组阳性细胞开始出现；60min组阳性细胞数量较30min组增多；120min组阳性细胞数量进一步增多，阳性细胞数量达到高峰（图2）；至360min时，阳性细胞数量明显下降.对FOS阳性神经元进行计数，以每组共计6只大鼠12张切片24个60×视野所得.

5、反应强度的时间规律见表1.　　表1大脑皮层内OX42阳性小胶质细胞和FOS阳性神经元反应的时间规律（略）　　P<0.01vs实验组各时间点　　2.4OX42阳性细胞和Fos阳性细胞的关系在OX42和Fos双标的切片中可见3种染色类型：①Fos阳性的神经元胞核（Fos+细胞）和Fos阳性的胶质细胞胞核（可能是星形胶质细胞），由于神经元胞核与胶质细胞胞核在大小上的明显差别，使之容易区别；②Fos阴性而OX42阳性的小胶质细胞（OX42+细胞），其胞质和突起为棕色，胞核未染色；③蓝色Fos阳性胞核和棕色OX42阳性的胞质双重标记的小胶质细胞（Fos+/OX42+细胞）.Fos

6、+/OX42+细胞与Fos+细胞和OX42+细胞在前脑的分布也很相似，主要位于大脑皮层（包括扣带回、额叶、顶叶和颞叶）、海马和杏仁核簇（图3）.　　箭头所指为Fos+/OX42+的小细胞（免疫组织化学双标染色法）.　　图3海人酸致癫发作120min后Fos和OX42在大脑皮层的分布.（略）　　3讨论　　KA是天然提取的谷氨酸类似物，它可以与突触后KA受体结合，产生兴奋性突触后电流，引起神经元的过度兴奋.全身或大脑局部注射KA可以导致动物癫痫发作，是理想的颞叶癫痫模型.　　我们通过对小胶质细胞的形态和数量变化规律的观察发现KA引起癫痫发作后30min海马静息小胶质细胞的数目就已经增多

7、，随后很快转化成激活型小胶质细胞并且表达Fos蛋白，此时癫痫的发作还不会引起神经元死亡，只是导致神经元的过度兴奋.这提示不仅神经元的死亡可以引起小胶质细胞的活化，而且神经元的过度兴奋也可以引起小胶质细胞的活化.本实验中神经元过度兴奋引起小胶质细胞活化的过程相当迅速，只需30min其数量就已经增多.Taylor等［2］在体外的实验证明谷氨酸可以作用于小胶质细胞上的代谢型谷氨酸受体，从而引起小胶质细胞的激活，KA引起癫痫发作