益气养阴活血法对糖尿病大鼠额叶皮质神经元nt

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1、益气养阴活血法对糖尿病大鼠额叶皮质神经元NT作者：陈伟燕，张跃明，葛刚锋，刘岩【摘要】目的探讨益气养阴活血法对糖尿病大鼠额叶皮质神经元神经营养因子3（NT-3）表达的影响。方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱发糖尿病大鼠模型，益气养阴活血药灌胃给药进行防治，8周后取脑做NT-3免疫组化染色。结果正常对照组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目多，染色深；糖尿病模型组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目少，染色浅；益气养阴活血法治疗组大鼠数目和染色与正常组大鼠接近。结论益气养阴活血法具有防治糖尿病大鼠额叶皮质神经元退行性

2、变的功效。【关键词】糖尿病益气养阴活血法额叶神经营养因子3大鼠EffectsofYiqiYangyinHuoxueprincipleontheexpressionofneurotrophin-3ofthefrontallobecortexneuronsindiabeticratbrain【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofYiqiYangyinHuoxueprincipleontheexpressionofneurotrophin-3ofthefrontallobecort

3、exneuronsindiabeticratbrain.MethodsThediabeticratmodelachofthetreatedgroup.Thebrainsatedmunochemistry8munochemistryshoanypositivecellsinthefrontallobecortexofthenormalgroupandtheyodelgroupdecreasedandthEircolorberandthecolorofpositivecellsinthetreatedgroupalgro

4、up.ConclusionTheYiqiYangyinHuoxueprinciplecaneffectivelyimprovethedegenerationofthefrontallobecortexneuronsindiabeticratbrain.【Keyethodfrontallobeneurotrophin-3rat糖尿病属中医消渴症的范畴，是一种严重危害人体健康的常见病、多发病。糖尿病已成为继肿瘤、心血管疾病之后的第三大严重的非传染性疾病，糖尿病晚期病人常伴脑神经元的退行性变。神经营养因子3（NT-3）广泛

5、分布在中枢神经系统内，具有维持神经元存活、诱导其轴突生长和促进损伤神经元的修复及阻止神经元损伤后死亡的功能。本实验观察养阴活血法治疗后糖尿病大鼠额叶皮质神经元NT-3的表达的改变，探讨此中医药疗法能否防止糖尿病大鼠额叶皮质神经元的退变。1材料与方法1.1试验药物及试剂益气养阴活血中药复方主要由黄芪30g，淮山药15g，葛根15g，枸杞子15g，丹参15g，红花12g，麦冬15g，马齿苋15g等组成，组成药物均购自浙江省中医院中药房，由浙江中医学院制剂室制备成含生药4g/ml，4℃冰箱保存备用。链脲佐菌素（STZ）和免

6、疫组化试剂盒均为Sigma公司产品。1.2动物分组及模型复制健康雄性SD大鼠30只，清洁级，体重：200～250g，购自浙江大学医学院动物实验中心。适应性饲养1周后，将大鼠随机分三组：正常对照组、糖尿病模型组和益气养阴活血法治疗组，每组各10只，后两组大鼠空腹12h后腹腔注射pH4.4枸橼酸钠缓冲液配成的1.25%STZ，按50mg/kg剂量给药，正常对照组大鼠腹腔注射相同剂量的pH4.4枸橼酸钠缓冲液。3天后空腹血糖大于16.7mmol/L为糖尿病模型成功。益气养阴活血法治疗组每日灌服养阴活血降糖饮10ml/kg1

7、次，正常对照组和糖尿病模型组每日灌服相同剂量的生理盐水。1.3免疫组织化学染色大鼠采用2%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉后，立即开胸暴露心脏，经左心室插管，剪开右心房，快速灌注灭菌生理盐水300ml后，改灌注4%多聚甲醛500ml，断颈后打开颅腔完整取脑，浸入灭菌后的30%蔗糖PBS溶液过夜直到脑组织块下沉。取出脑组织块，冰冻切片机作连续切片，片厚20μm。按标准ABC免疫组化法操作，一抗为兔抗大鼠、小鼠等多克隆NT-3抗体（1：200），阴性对照组不加一抗，二抗为羊抗兔生物素化抗体（1：100）。1.4结果观

8、察每组动物各取8只，每只在相应的额叶部位连续切片，每隔三张取一张，共取15张切片，按照包新民图谱的B-1.0至B-1.6平面中的Prcl区，在装有目镜网格测微尺(80μm×80μm)400倍视野下计数每例切片10个网格的NT-3阳性细胞数，计算出每0.05mm2面积内的阳性神经元数目即阳性细胞密度。每张切片在相应部位在Olympus显微镜下拍照