银杏叶提取物对h2o2诱导的晶状体上皮细胞bcl

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1、银杏叶提取物对H2O2诱导的晶状体上皮细胞Bcl作者：李爽乐，罗清礼，李正时，官鹏，卢燕，江爱华【摘要】目的：观察银杏叶提取物（EGb761）对晶状体上皮细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法：将离体培养的SD大鼠的晶状体上皮细胞分成3组:实验组用H2O2+EGb761处理，对照组用H2O2处理，空白对照组未做任何处理。用免疫组化的方法检测上皮细胞Bcl-2，Bax的表达，分析实验组、对照组和空白对照组的表达情况。结果：Bcl-2蛋白表达的阳性细胞率:实验组随时间的延长而上升，24h时为(20.7±1.4)%，对照组则随时间的延长而下降，24h时为(

2、2.6±0.6)%，空白对照组为(6.8±1.1)%；Bax蛋白表达的阳性细胞率：实验组随时间的延长无明显变化，24h时为(10.7±0.9)%；对照组则随时间的延长而上升，24h时为(33.4±4.6)%，空白对照组为(4.6±0.8)%。结论：EGb761通过使晶状体上皮细胞Bcl-2蛋白表达增加，Bcl-2/Bax减少，阻止氧化损伤所致的晶状体上皮细胞凋亡；细胞凋亡可能与白内障形成有关，EGb761在早期白内障形成中可能起抑制作用。【关键词】银杏叶提取物Bcl-2；Bax氧化应激晶状体上皮细胞0引言白内障的发生与机体抗氧化损伤状态有关，老年性白内障患者房水中H

3、2O2含量高于正常[1]，氧化应激可能与老年性白内障有关。我们模拟老年性白内障患者房水中H2O2浓度处理Sprague-Dapus光学显微镜(日本)，各种培养瓶和培养皿，孵育湿盒等。无酚红M199(Sigma)，按说明书配制成培养液，加入HEPES(Fluka)25mmol/L，青霉素100kU/L,链霉素100kU/L，过滤、除菌、分装，-20℃保存。用前加入Ginaton(德国舒培大药厂，含EGb76117.5g/L)，葡萄糖氧化酶(Sigma)，300mL/LH2O2(上海，分析纯)，葡萄糖(上海，分析纯)，并调pH至7.2～7.4。0.01mol/LPBSp

4、H7.6；0.5mol/LTris/HCLpH7.6；羊血清工作稀释度(1∶10)；双蒸水；300ml/LH2O2；一抗鼠抗人Bcl-2单克隆抗体为SantaCruzBiotechnology公司产品，4℃保存，工作稀释度(1∶100)；一抗羊抗人Bax抗体为SantaCruzBiotechnology公司产品，4℃保存，工作稀释度(1∶100)；SP试剂盒为ZYMED公司产品，4℃贮存，工作稀释度(1∶100)；DAB为Sigma公司产品。1.2方法四周龄SD大鼠，质量110±10g，雌雄兼用，无眼疾。购自华西医科大学动物实验中心。CO2吸入处死，摘取眼球，置于5

5、00kU/L青霉素生理盐水中冲洗，在无菌条件下取透明晶状体。将透明晶状体放入含M1991.5mL的24孔培养板中，置温度37℃、95%湿度、50mL/LCO2培养箱中培育1～2h，备用。模拟老年性白内障患者房水中H2O2浓度对离体培养SD大鼠晶状体上皮细胞进行处理，分为H2O2添加EGb761处理实验组(以下简称实验组)，H2O2处理对照组(以下简称对照组)，只有M199培养液的空白对照组(以下简称空白组)。在M199中加入0.95mmol/L葡萄糖、葡萄糖氧化酶1nkat、90μmol/LH2O2。可使H2O2浓度在8h内维持于90±5μmol/L。据3讨论原癌基

6、因bcl-2是抑制细胞凋亡(apoptosis)途径中的一个重要基因，bcl-2通过抗氧化的途径阻止细胞发生凋亡[2-6]。bcl-2能对抗H2O2诱导的细胞液钙浓度升高和继发的谷胱苷肽还原系统功能损害而引起的细胞死亡[7-9]。已经发现抗氧化剂如坏血酸能通过增加bcl-2表达而减少细胞凋亡的发生，但氧化应激诱导剂引起细胞增殖或凋亡与bcl-2功能关系尚未完全明了[10]。我们的实验结果显示：对照组在H2O2作用的早期Bcl-2蛋白表达增加，是否晶状体上皮细胞自身抗氧化防御机制对氧化应激的反应，有待进一步实验证实。bax基因与bcl-2基因有21%的同源性，bax具

7、有促进细胞凋亡发生的作用，氧化应激诱导Bax表达增加，并通过使Bcl-2水平下降，引起继之而发生的细胞凋亡。Bax可与Bcl-2形成同源或异源二聚体，细胞内Bax和Bcl-2的量决定了Bcl-2/Bax和Bax/Bax二聚体的比例，而这一比例又决定了细胞对凋亡信号的易感性，调节细胞死亡和存活的平衡状态[11]。已有实验证实，机体的抗氧化防御机制如谷胱苷肽还原系统能力的提高可减少bax表达所引起的细胞凋亡的发生，可知氧化还原的动态平衡在维持细胞生存中起着必不可少的重要作用[12]。在我们的实验中发现，对照组在H2O2作用的早期引起Bcl-2蛋白表达增加，随后出现B