鼻咽癌组织dna聚合酶β基因突变与ebv感染相关论文

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1、鼻咽癌组织DNA聚合酶β基因突变与EBV感染相关论文郑红，李明善,赵国强，董子明，宋宝义【关键词】鼻咽肿瘤DNApolymeraseβgenemutationinhumannasopharyngealcanceranditsrelationshiperaseβ(polβ)genemutationinhumannasopharyngealcanceranditsrelationshipatissuesandcorrespondingnormalepithelialtissuesutationplifiedersandtheresultsutation

2、utationrate30.8%)andthereutationinjuxtacanceroustissues.ManytypesofmutationentindicatedthatthecasesofpolβSSCPabnormalannasopharyngealcarcinoma,inoacidandspatialstructurechange.ThesemutationsandEBVinfectionmayplayanimportantroleintumorgenesis.【Keyeraseβ;nasopharyngealneoplasms;

3、genemutation;EBV【摘要】目的:研究探讨鼻咽癌中DNA聚合酶β(DNApolymeraseβ,polβ)的变异情况及与EBV感染有无相关关系.方法:采用RTPCR法（逆转录DNA聚合酶链反应）、PCRSSCP（聚合酶链单链构象多态性分析）、DNA序列分析法对26例鼻咽癌组织及癌旁组织标本进行polβ基因突变研究.用特异性EBV引物PCR扩增法检测EB病毒，分析出现EBVPCR阳性与polβ突变及鼻咽癌发生之间的相关性.结果:polβSSCP结果显示癌旁组织标本中polβ无突变；26例鼻咽癌组织标本中存在polβ基因变异的有8例，突变率

4、为30.8%.polβ基因变异的鼻咽癌标本测序结果显示：核苷酸序列有多种形式的改变.提取DNA用EBV引物进行扩增，26例鼻咽癌标本中出现阳性的有24例，阳性率为92.3%.结论:首次发现在鼻咽癌中存在多种形式的polβ突变.freeleraseβ,polβ）是一种修复酶，在哺乳动物细胞中参与DNA的合成和修复的某些过程［1,2］.其缺陷与一些肿瘤的发生有关，在人类多种肿瘤中存在polβ突变［3,4］.然而有关鼻咽癌中有无polβ基因突变尚少见报道.我们采集鼻咽癌(nasopharynxcancer,NPC)及癌旁组织(juxtacancerous

5、tissue,JCT)标本，进行polβ基因突变调查，检测EBV感染，并分析与polβ突变间的关系如下.1材料和方法1.1材料鼻咽癌标本26例（NPCaz）病理证实为鳞状上皮细胞癌，每份标本取癌组织和癌旁正常组织各1块，标本离体后迅速置于液氮中保存.参考GenBank的M13740序列设计出7对SSCP引物，1对完整的全基因序列引物.参考GenBank的M20820的EBV病毒序列设计出1对EBVPCR检测引物［5］.1.2方法按照RNA提取试剂盒步骤进行提取总RNA；逆转录合成cDNA，进行七区段扩增；取PCR扩增产物与变性载样缓冲液混匀，在非变

6、性聚丙烯酰胺凝胶电泳.取下凝胶，银染后照相记录并分析SSCP结果；PCR产物与pGEMT载体连接，转化入JM109细胞中进行PCR产物的克隆；用碱裂解法提取质粒DNA，利用荧光标记法ABI377测序仪双向测定DNA序列（由上海生工公司完成）.所得结果利用DNASIS软件与GenBank中查到的DNApolβ基因进行同源比较和分析.按照Qiagen公司DNA提取试剂盒说明提取组织的DNA；以去离子水为阴性对照，以EBV为阳性对照进行EBVDNA的PCR扩增；取PCR扩增产物溴酚蓝加样缓冲液充分混合后，于20g/L琼脂糖凝胶上电泳，紫外光下观察扩增结果

7、.2结果在26例鼻咽癌组织中有8例SSCP异常，突变率为30.8%(Fig1).而对应的26例癌旁组织中未见异常；鼻咽癌组织polβ突变位点见Tab1；DNASIS软件Choufasman算法推测polβ肽段二级结构；在26例鼻咽癌及对应癌旁组织中共检出，EBVDNA阳性的24例（癌及对应癌旁组织一致），EBVDNA的阳性率为92.3%(Fig2).表1鼻咽癌组织中polβ突变位点及类型（略）3讨论polβ是一重要的DNA修复酶，该酶基因的突变与肿瘤的发生密切［6］.由于PCRSSCP技术的引入，使得从大量标本中准确、灵敏地筛选出DNApolβ基因

8、突变成为可能,对DNApolβ基因突变的研究更为深入.我们对非高发区鼻咽癌（均为鳞癌）的研究,首次发现polβ基因的突变，