鼻咽癌组织dna聚合酶β基因突变与ebv感染相关

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1、鼻咽癌组织DNA聚合酶β基因突变与EBV感染相关郑红，李明善,赵国强，董子明，宋宝义【关键词】鼻咽肿瘤DNApolymeraseβgenemutationinhumannasopharyngealcanceranditsrelationshiperaseβ(polβ)genemutationinhumannasopharyngealcanceranditsrelationshipatissuesandcorrespondingnormalepithelialtissuesutationplifiedersandtheresu

2、ltsutationutationrate30.8%)andthereutationinjuxtacanceroustissues.ManytypesofmutationentindicatedthatthecasesofpolβSSCPabnormalannasopharyngealcarcinoma,inoacidandspatialstructurechange.ThesemutationsandEBVinfectionmayplayanimportantroleintumorgenesis.　　【Keyeraseβ;

3、nasopharyngealneoplasms;genemutation;EBV　　【摘要】目的:研究探讨鼻咽癌中DNA聚合酶β(DNApolymeraseβ,polβ)的变异情况及与EBV感染有无相关关系.方法:采用RTPCR法（逆转录DNA聚合酶链反应）、PCRSSCP（聚合酶链单链构象多态性分析）、DNA序列分析法对26例鼻咽癌组织及癌旁组织标本进行polβ基因突变研究.用特异性EBV引物PCR扩增法检测EB病毒，分析出现EBVPCR阳性与polβ突变及鼻咽癌发生之间的相关性.结果:polβSSCP结果显示癌旁组织标本

4、中polβ无突变；26例鼻咽癌组织标本中存在polβ基因变异的有8例，突变率为30.8%.polβ基因变异的鼻咽癌标本测序结果显示：核苷酸序列有多种形式的改变.提取DNA用EBV引物进行扩增，26例鼻咽癌标本中出现阳性的有24例，阳性率为92.3%.结论:首次发现在鼻咽癌中存在多种形式的polβ突变，有polβ突变的病例均有EBV感染.　　【关键词】DNA聚合酶β；鼻咽肿瘤；基因,突变；EB病毒　　0引言　　DNA聚合酶β（DNApolymeraseβ,polβ）是一种修复酶，在哺乳动物细胞中参与DNA的合成和修复的某些过程

5、〔1,2〕.其缺陷与一些肿瘤的发生有关，在人类多种肿瘤中存在polβ突变〔3,4〕.然而有关鼻咽癌中有无polβ基因突变尚少见报道.我们采集鼻咽癌(nasopharynxcancer,NPC)及癌旁组织(juxtacanceroustissue,JCT)标本，进行polβ基因突变调查，检测EBV感染，并分析与polβ突变间的关系如下.　　1材料和方法　　1.1材料　　鼻咽癌标本26例（NPCaz）病理证实为鳞状上皮细胞癌，每份标本取癌组织和癌旁正常组织各1块，标本离体后迅速置于液氮中保存.参考GenBank的M13740序列

6、设计出7对SSCP引物，1对完整的全基因序列引物.参考GenBank的M20820的EBV病毒序列设计出1对EBVPCR检测引物〔5〕.　　1.2方法　　按照RNA提取试剂盒步骤进行提取总RNA；逆转录合成cDNA，进行七区段扩增；取PCR扩增产物与变性载样缓冲液混匀，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳.取下凝胶，银染后照相记录并分析SSCP结果；PCR产物与pGEMT载体连接，转化入JM109细胞中进行PCR产物的克隆；用碱裂解法提取质粒DNA，利用荧光标记法ABI377测序仪双向测定DNA序列（由上海生工公司完成）.所得结果利用

7、DNASIS软件与GenBank中查到的DNApolβ基因进行同源比较和分析.按照Qiagen公司DNA提取试剂盒说明提取组织的DNA；以去离子水为阴性对照，以EBV为阳性对照进行EBVDNA的PCR扩增；取PCR扩增产物溴酚蓝加样缓冲液充分混合后，于20g/L琼脂糖凝胶上电泳，紫外光下观察扩增结果.　　2结果　　在26例鼻咽癌组织中有8例SSCP异常，突变率为30.8%(Fig1).而对应的26例癌旁组织中未见异常；鼻咽癌组织polβ突变位点见Tab1；DNASIS软件Choufasman算法推测polβ肽段二级结构；在2

8、6例鼻咽癌及对应癌旁组织中共检出，EBVDNA阳性的24例（癌及对应癌旁组织一致），EBVDNA的阳性率为92.3%(Fig2).表1鼻咽癌组织中polβ突变位点及类型（略）　　3讨论　　polβ是一重要的DNA修复酶，该酶基因的突变与肿瘤的发生密切〔6〕.由于PCRSSCP技术的引入，使