胎盘贴壁细胞的生物学特性

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1、胎盘贴壁细胞的生物学特性【关键词】胎盘；贴壁细胞；干细胞　　Biologicalcharacteristicsofplacentaderivedadherentcells　　【Abstract】AIM:Toisolateandculturehumanplacentaderivedadherentcells(hPDAC)invitroandstudythEirbiologicalcharacteristicsinvolvingmorphology,phenotypeanddifferentiation.METHODS:Mononucl

2、earcellsL/LFBS.Theirsurfacemarkersetry;thegroade;cellsof3passagesinC,dexamethasoneandsodiumβglycerophosphate,andtheinducedcellsatrixmineralizationethasoneandinsulin,andtheinducedcellseasfibroblasts,andadherentcellsmineralizationandafter7d,oilredOstainingrevealedtheappe

3、aranceoffatdrops.CONCLUSION:ThehPDACedtohavetheosteogenicandadipogenicpotentials,indicatingthattheycouldberegardedasanalternativesourceofstemcells.　　【Keycells　　【摘要】目的：通过体外分离和培养胎盘贴壁细胞，以研究其形态、表型和分化特点.方法：采用IV型胶原酶消化人胎盘组织，获得单个核细胞，接种于100mL/LFBS低糖DMEM培养基中，贴壁后常规换液、传代，流式细胞仪检测其表

4、面标志，绘制生长曲线.采用β甘油磷酸钠、维生素C、地塞米松联合诱导，使胎盘贴壁细胞分化为成骨细胞，诱导后10d行茜素红染色；采用地塞米松、胰岛素诱导，使胎盘贴壁细胞分化为脂肪细胞，油红O染色鉴定.结果：培养7~14d后有少量贴壁细胞生长，逐渐呈成纤维细胞状，表达CD29，CD44和CD105，不表达CD34，CD45，CD19；在成骨诱导10d后细胞茜素红染色可见钙盐沉积，成脂肪诱导7d后油红O染色见脂肪滴形成.结论：通过不同方式诱导培养，胎盘贴壁细胞可分化为成骨细胞及脂肪细胞，提示胎盘贴壁细胞可能是新的干细胞来源.　　【关键词】胎

5、盘；贴壁细胞；干细胞　　0引言　　间充质干细胞（marroalcell,MSC）主要来源于骨髓，可以分化为多种组织细胞：成骨、软骨、脂肪、神经细胞等，但随着年龄增长或合并感染、肿瘤等疾病时骨髓干细胞的分化能力明显下降，因此寻找新的干细胞成为当务之急.近几年来有学者发现胎盘组织中存在MSC.为进一步证实这一发现，我们从胎盘中提取贴壁细胞，观察其生物学特性，以探讨其是否具有干细胞特性.　　1材料和方法　　1.1材料足月剖宫产的胎盘（产妇同意），低糖DMEM（Gibco公司），新生牛血清（FBS，Gibco公司），IV型胶原酶（Sigma

6、公司），胰蛋白酶（Sigma公司），鼠抗人单克隆抗体CD19，CD44，CD45，CD105，CD34，CD29（晶美公司），茜素红（Sigma），油红O（Sigma），倒置显微镜（Olympas），CO2培养箱（Jouan）.　　1.2方法　　1.2.1胎盘贴壁细胞的分离和培养取足月剖宫产胎盘，剪取胎儿侧胎盘组织，PBS反复冲洗，剪成碎块，以1g/LIV型胶原酶37℃消化30min，取上清液，以800r/min离心5min，沉淀物重复消化，收集每次离心后的细胞沉淀，PBS冲洗2遍，以1×107/L的密度接种于100mL/LFBSD

7、MEM培养基中，贴壁后3~5d换液1次，取传3代以上细胞备用.　　1.2.2胎盘贴壁细胞的表型测定取第3代细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化3min，100mL/LFBS终止消化，PBS冲洗2遍，调整细胞数为1×104/μL，分别加入鼠抗人单克隆抗体CD19,CD44,CD45,CD105,CD34，流式细胞仪检测细胞表型.　　1.2.3生长曲线的绘制取第3代细胞，以2×107/L的密度接种于12孔板中，每日取3复孔，台盼蓝染色计数活细胞，连续培养计数7d，计算平均值，绘制生长曲线.　　1.2.4细胞周期测定取第3代细胞，以2.5g/

8、L胰蛋白酶消化3min，10mol/LFBS终止消化，PBS冲洗2遍，调整细胞数为1×106/L，流式细胞仪检测细胞周期.　　1.2.5细胞诱导分化及染色取第3代胎盘细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化3min,10mol/LFBS终止消