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1、胎盘贴壁细胞临床药学论文【摘要目的摘要：通过体外分离和培养胎盘贴壁细胞，以探究其形态、表型和分化特征力法摘耍：采用IV型胶原酶消化人胎盘组织，获得单个核细胞，接种J*100mL/LFBS低糖DMEM培养基屮，贴壁后常规换液、传代，流式细胞仪检测其表面标志，绘制牛长Illi线.采用卩卄油磷酸钠、维生索C、地塞米松联合诱导，使胎盘贴壁细胞分化为成骨细胞，诱导后10d行茜素红染色；采用地塞米松、胰岛素诱导，使胎盘贴壁细胞分化为脂肪细胞，油红O染色鉴定.结果摘要:培养7〜14d后有少量贴壁细胞生长，逐渐呈成纤维细胞
2、状，表达CD29,CD44和CD105,不表达CD34,CD45,CD19；在成骨诱导10d后细胞茜素红染色可见钙盐沉积，成脂肪诱导7d后油红O染色见脂肪滴形成.结论摘要：通过不同方式诱导培养，胎盘贴壁细胞可分化为成骨细胞及脂肪细胞，提示胎盘贴壁细胞可能是新的干细胞来源.【胎盘；贴壁细胞；干细胞0引言间充质干细胞(mairowstromalcell,MSC)主要來源于骨髓，可以分化为多种组织细胞摘要：成骨、软骨、脂肪、神经细胞等，但随着年龄增长或合并感染、肿瘤等疾病时骨髓干细胞的分化能力明显下降，因此寻找新
3、的干细胞成为当务Z急•近几年来有学者发现胎盘组织屮存在MSC.为进一步证实这一发现，我们从胎盘屮提取贴壁细胞，观察具朱物学特性，以探索其是否具冇干细胞特性.1材料和方法1.1材料足月剖宫产的胎盘（产妇同意），低糖DMEMCGibco公司），新生牛血清（FBS,Gibco公司），IV型胶原臨（Sigma公司），胰蛋白®（Sigma公司），鼠抗人单克隆抗体CD19,CD44,CD45,CD105,CD34,CD29（晶美公司）,茜素红（Sigma）,汕红O（Sigma）,倒置显微镜（Olympas）,CO2培养
4、箱（Jouan）.1.2方法1.2.1胎盘贴榷细胞的分离和培养取足月剖宫产胎盘，剪取胎儿侧胎盘组织，PBS反复冲洗,剪成碎块,以lg/LIV型胶原酶37C消化30min,取上清液,以800r/min离心5min,沉淀物重复消化，收集每次离心后的细胞沉淀，PBS冲洗2遍，以1X107/L的密度接种于lOOmL/LFBSDMEM培养基中，贴壁示3〜5d换液1次，取传3代以上细胞备用.1.2.2胎盘贴壁细胞的表型测定取第3代细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化3min,100mL/LFBS终止消化,PBS冲洗2遍,调
5、整细胞数为lxlO4/gL,分别加入鼠抗人单克隆抗体CD19,CD44,CD45,CD105,CD34,流式细胞仪检测细胞表型.1.2.3生长曲线的绘制取第3代细胞，以2X107/L的密度接种于12孔板中，每日取3复扎台盼蓝染色计数活细胞，连续培养计数7d,计算平均值，绘制牛长Illi线.1.2.4细胞周期测定取第3代细胞，以2.5g/L胰蛋口酶消化3min,10mol/LFBS终止消化，PBS冲洗2遍，调整细胞数为1X106/L,流式细胞仪检测细胞周期.1.2.5细胞诱导分化及染色取第3代胎盘细胞，以2.
6、5g/L胰蛋白酶消化3min,10mol/LFBS终止消化,800r/min离心5min,PBS冲洗3遍，分为4组分别以1H05/L细胞数接种于6孔板中，1组加入成骨诱导剂（20mmol/L
7、3甘汕磷酸钠、50mg/L维牛索C,10mmoI/L地塞米松,100mL/L新生牛血清DMEM培养革），2组加入脂肪诱导剂（10mmoI/L地塞米松、10mg/L胰岛素、lOOmL/L新牛牛血清DMEM培养基），3,4组为対照组，采用100mL/L新生牛血清DMEM培养基培养，置3TC,50mL/LCO2孵箱培养，每3
8、〜5日换液1次•取培养10d后的1,3组细胞,倒掉培养液,多聚甲醛固定30min,PBS冲洗3遍,茜素红染色8h,显微镜下观察阳性结果.取培养7d后的2,4组细胞，多聚甲醛固定后油红O染色.2结果2」胎盘细胞的原代培养消化胎盘组织获得少量的单个核细胞，约7〜14d后贴壁，从不规则形，逐渐变为梭形，呈漩涡状生长，约4wk后长满瓶底，胞体呈细长，形态类似成纤维细胞（图2）,lwk左右传代1次，可稳定传至10代.流式细胞仪检测显示低表达CD29,高表达CD44和CD105,不表达CD34,CD45和CD19.细胞
9、的对数生长期约在第2〜4日,其倍增时间为39h（图1）.流式细胞仪检测发现G0/G1,S,G2/M期的比例分别为20.15%,72.54%和6.89%.图1胎盘贴壁细胞牛•长曲线（略）2.2胎盘细胞的诱导分化成骨诱导组细胞在诱导10d吋可见细胞呈漩涡状重叠生长，并聚集成团，茜索红染色可见多个散在分布大小、形态各异的不透明棕红色钙化结节.对照组少见钙化结节（图3）.成脂肪诱导组细胞在诱导7d时油红O染色可见细胞中出
