超声介导微泡造影剂对人huvec活性的影响论文

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1、超声介导微泡造影剂对人HUVEC活性的影响论文.freelediatedmicrobubblecontrastagent(MBCA)ofdifferentconcentrationsonhumanumbilicalveinendothelialcell（HUVEC）activity.MethodsTheeffectofultrasoundmediatedMBCAofdifferentconcentrationsonHUVECactivityetricexperiment.ResultsUltrasoundmediatedMBCAofhigherconcentrationdecreas

2、edthequantityofviablecells.ConclusionsUltrasoundmediatedMBCAofdifferentconcentrationsexertsdifferenteffectsonthequantityofviableHUVECs.【Keyanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)新近研究发现微泡造影剂（MBCA）可成为基因治疗的一种安全、有效的载体。但是，如果超声剂量过大，或MBCA浓度过高时，利用超声介导MBCA实现基因的定向转移这一技术同样也会对机体产生一定的有害的生物学效应。影响MBCA介导基因治疗效果的

3、因素很多，除不同组织和基因种类的影响外，超声能量、辐照时间、基因与微泡比例等诸多因素均可对基因治疗产生影响。本研究通过观察超声介导MBCA对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的作用.freell一次性培养瓶，培养箱，倒置显微镜（IMS），显微镜，计数板，超声探头（Philipsie33S51，频率1～5mHz，heart：pen档），振荡混合仪，酶联免疫检测仪，温度仪，水浴箱。1.2实验方法1.2.1细胞培养含10%FBS的1640细胞培养液培养HUVEC，每1～2d换液1次，每3～4d传代1次。1.2.2SonoVue的配制1.68ml注射用生理盐水（0.9%Nacl）加入

4、SonoVue药瓶中（每瓶含SF659mg，冻干粉25mg），剧烈震荡20s至瓶内药物混合均匀后备用（此时SonoVue浓度为50mg/ml，以下称初SonoVue）。1.2.3体外实验MTT比色法测定不同浓度SonoVue对HUVEC活性的影响1.2.3.1实验分组按照添加SonoVue浓度不同分为A组：每孔加初SonoVue（浓度为50mg/ml）50μl。B组：将初SonoVue稀释2倍后（浓度为25mg/ml），每孔加50μl。C组：将初SonoVue稀释3倍后（浓度约17mg/ml），每孔加50μl。D组：将初SonoVue稀释4倍后（浓度为12.5mg/ml），每孔加50μl

5、。E组：对照组，每孔加生理盐水50μl。F组：空白对照组，不加细胞和SonoVue，每孔加200μl培养液。以上6组每组8孔。1.2.3.2实验步骤（1）培养细胞加入条件：用0.25%胰酶消化单层培养细胞，用含10%FBS的1640培养液配成细胞悬液，以每孔含104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积150μl。如上所述，每组加入不同浓度的SonoVue，然后超声辐照，培养皿固定于37℃水浴箱水面，探头距培养皿底部约30mm。辐照条件：超声机械指数1.4，辐照时间为60s。（2）培养细胞：经上述处理后将细胞培养板放入CO2孵箱，在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下，培养20h。（3）呈色

6、：培养20h后，每孔加入MTT溶液10μl，37℃，继续孵育4h，终止培养，仔细吸弃孔内培养上清液。然后每空加入DMSO150μl，振荡10min。（4）比色：在酶联免疫检测仪上选定490nm波长，测各孔光吸收值，记录结果。整个实验重复3次。MTT测细胞活性，E组细胞的存活率为100％，A～D组细胞的存活率=每组细胞的吸光值/E组的吸光值×100%。1.3统计学处理计量资料采用x±s表示。使用SPSS12.0软件作方差分析。2结果2.1IMS观察正常生长的HUVEC大部分贴壁。早期细胞呈多角、球形，少数细胞伸展，24～48h生长最快，逐渐生长成梭形，有些细胞排列呈鱼贯状相连，间有旋涡状排

7、列。核清晰，呈圆形或椭圆形，核分裂相多见，1～2核仁，胞浆丰富，内含小颗粒。于2～3d后融合，5～7d胞体呈多角形，相互嵌合，为单层呈铺路石状排列。见图1。图中箭头所示皱缩、致密度高的细胞为凋亡细胞图1传代后第5天HUVEC（×100）2.2MTT比色法测定不同浓度SonoVue对HUVEC活性的影响不同浓度SonoVue对HUVEC活性的影响不同。超声介导初SonoVue及其稀释2倍时细胞存活率较低，分别为（63±9）%及（65±