超声介导微泡造影剂对人huvec活性的影响

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1、超声介导微泡造影剂对人HUVEC活性的影响作者：刘玉凤任卫东唐力陈昕马春艳张莹【摘要】目的探讨超声介导不同浓度微泡造影剂(SonoVue)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)活性的影响。方法应用MTT比色法检测不同浓度SonoVue对HUVEC活性的影响。结果超声介导下，随着SonoVue浓度的增加，活细胞数呈减少趋势。结论超声介导下不同浓度SonoVue对HUVEC的活性有着不同的影响。【关键词】超声；微泡造影剂；人脐静脉血管内皮细胞【Abstract】ObjectiveToresearchtheeffectsofultrasoundmedi

2、atedmicrobubblecontrastagent(MBCA)ofdifferentconcentrationsonhumanumbilicalvEinendothelialcell（HUVEC）activity.MethodsTheeffectofultrasoundmediatedMBCAofdifferentconcentrationsonHUVECactivityetricexperiment.ResultsUltrasoundmediatedMBCAofhigherconcentrationdecreasedthequanti

3、tyofviablecells.ConclusionsUltrasoundmediatedMBCAofdifferentconcentrationsexertsdifferenteffectsonthequantityofviableHUVECs.【KeyanumbilicalvEInendothelialcells(HUVECs)新近研究发现微泡造影剂（MBCA）可成为基因治疗的一种安全、有效的载体。但是，如果超声剂量过大，或MBCA浓度过高时，利用超声介导MBCA实现基因的定向转移这一技术同样也会对机体产生一定的有害的生物学效应。影响MBC

4、A介导基因治疗效果的因素很多，除不同组织和基因种类的影响外，超声能量、辐照时间、基因与微泡比例等诸多因素均可对基因治疗产生影响。本研究通过观察超声介导MBCA对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的作用，探讨应用超声介导MBCA对HUVEC活性的影响。1材料与方法1.1材料及试剂HUVEC（南京凯基生物科技开发有限公司）。试剂：胎牛血清（FBS）（Gibco公司，美国），1640培养液，胰酶蛋白消化液，青霉素，链霉素，MBCA（商品名：SonoVue，Bracco公司，意大利），MTT溶液，二甲基亚枫（DMSO），0.9%生理盐水。实验器

5、材：96孔培养皿（Coring公司，美国），25ml一次性培养瓶，培养箱，倒置显微镜（IMS），显微镜，计数板，超声探头（Philipsie33S51，频率1～5mHz，heart：pen档），振荡混合仪，酶联免疫检测仪，温度仪，水浴箱。1.2实验方法1.2.1细胞培养含10%FBS的1640细胞培养液培养HUVEC，每1～2d换液1次，每3～4d传代1次。1.2.2SonoVue的配制1.68ml注射用生理盐水（0.9%Nacl）加入SonoVue药瓶中（每瓶含SF659mg，冻干粉25mg），剧烈震荡20s至瓶内药物混合均匀后备用（此时So

6、noVue浓度为50mg/ml，以下称初SonoVue）。1.2.3体外实验MTT比色法测定不同浓度SonoVue对HUVEC活性的影响1.2.3.1实验分组按照添加SonoVue浓度不同分为A组：每孔加初SonoVue（浓度为50mg/ml）50μl。B组：将初SonoVue稀释2倍后（浓度为25mg/ml），每孔加50μl。C组：将初SonoVue稀释3倍后（浓度约17mg/ml），每孔加50μl。D组：将初SonoVue稀释4倍后（浓度为12.5mg/ml），每孔加50μl。E组：对照组，每孔加生理盐水50μl。F组：空白对照组，不加细胞和

7、SonoVue，每孔加200μl培养液。以上6组每组8孔。1.2.3.2实验步骤（1）培养细胞加入条件：用0.25%胰酶消化单层培养细胞，用含10%FBS的1640培养液配成细胞悬液，以每孔含104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积150μl。如上所述，每组加入不同浓度的SonoVue，然后超声辐照，培养皿固定于37℃水浴箱水面，探头距培养皿底部约30mm。辐照条件：超声机械指数1.4，辐照时间为60s。（2）培养细胞：经上述处理后将细胞培养板放入CO2孵箱，在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下，培养20h。（3）呈色：培养20h后，每孔加入M

8、TT溶液10μl，37℃，继续孵育4h，终止培养，仔细吸弃孔内培养上清液。然后每空加入DMSO150μl，振荡10min。（4）比色：在