整合素β1在小鼠慢性心肌炎中的作用论文

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1、整合素β1在小鼠慢性心肌炎中的作用论文吴辉唐其柱叶明丁家望李书国李莉李松李稳慧陈勇杨俊【摘要】目的观察整合素β1(CD29)在慢性心肌炎小鼠心肌的表达，探讨其在慢性心肌炎中的作用。方法猪心肌肌凝蛋白致Balb/c小鼠自身免疫性心肌炎模型，观察并记录免疫小鼠发病情况，同时用免疫组化SP法检测CD29在心肌的表达变化。结果实验早期(初次免疫后14、30d)，小鼠心肌淋巴细胞浸润较明显，CD29在心肌的表达高于正常组(P0.05);实验后期(60、120d)，小鼠心肌炎症细胞减少，而心脏重量与体重的比值增加显著.freelol/L磷酸钾缓冲液中，终浓度1.

2、0mg/ml,然后与等体积完全弗氏佐剂(Sigma公司)混合研磨成乳浊液，在实验组小鼠双侧腹股沟、腋部皮下及足垫皮下注射，每只小鼠注射肌凝蛋白量为1mg。对照组仅用等量的0.14mol/L磷酸钾缓冲液与等体积完全弗氏佐剂混合液在相同位置注射。免疫时间为第1、7、30天。分别在初次免疫后第14、30、60和120天处死小鼠前，称取小鼠的体重及心脏重量，并计算二者比值。1.3病理检查心脏离体后，以10%甲醛固定，石蜡包埋后切片，部分做常规HE染色，显微镜下观察，余下切片待做免疫组织化学检测。1.4免疫组化SP法将石蜡切片脱蜡及抗原修复，磷酸盐缓冲液(PB

3、S)冲洗后，加3ml/L过氧化氢处理10min;再以PBS冲洗后，依次滴加正常羊血清(室温30min)，大鼠抗小鼠单克隆抗体(Biolegend公司)(1∶200)(37℃孵育60min,PBS洗)，生物素标记的兔抗大鼠IgG(中山公司)(1∶40，37℃孵育30min，PBS洗)，以二氨基联苯胺(DAB)显色、苏木素衬染，然后常规脱水、透明、封片，镜检观察结果，呈棕黄色者判为阳性。采用HPIAS2000型图像分析软件统计阳性率。1.5统计学处理实验数据以x±s表示，组间比较采用t检验，采用SPSS12.0软件进行统计分析。2结果2.1小鼠心脏重量与

4、体重比值与对照组比较，初次免疫后14d实验组小鼠心脏重量与体重比值无显著变化(P0.05);而在免疫30d后，实验组小鼠心脏重量与体重比值明显增加(P0.05)，见表1。表1两组小鼠不同时间点心重/体重比较与对照组比较：1)P0.05，下表同2.2病理检查结果初次免疫后第14～30天，心肌炎性细胞浸润明显，心肌细胞间质可见到局灶性的炎性细胞浸润，主要为淋巴细胞，心肌细胞结构完好。第60～120天，炎症细胞减少，纤维化开始出现。对照组中均未见到上述改变(图1)。2.3CD29表达变化随着病程进展，CD29在心肌的表达逐渐增多(图2);与对照组相比，在初

5、次免疫30d以后，实验组小鼠心肌CD29的表达显著增加(P0.05)，见表2。表2两组小鼠CD29在心肌的表达比较3讨论本实验中，来自于异体(猪)的肌凝蛋白与小鼠自身抗原心肌凝蛋白结构相似，它可激活自身反应性T细胞而诱发小鼠自身免疫性心肌炎，即是近年来提出的分子模拟理论〔1〕。近年研究发现，在小鼠体内用抗体阻止CD29的作用，则能够阻止迟发型超敏反应的发生，这包括移植物对宿主疾病、抗体诱导的关节炎、半抗原诱导的结肠炎等〔3～6〕。本实验中，慢性心肌炎小鼠心肌CD29的表达随着心肌炎症及纤维化的进展而逐渐升高，其机制可能在于：①为炎症细胞的募集和保留

6、提供了一种黏附环境〔7〕;②在以后的过程中作为层黏蛋白、纤维素连接蛋白和玻连蛋白的受体参与对心肌细胞的固定〔8〕;③像急性心肌炎中高度表达的细胞间黏附分子一样〔9〕，调节释放毒素的免疫效应细胞黏附到表达CD29的心肌细胞。在整合素家族中，CD29还独特表达于心肌〔10〕，它可作为心肌细胞与细胞外基质(ECM)相互作用的黏附受体，使细胞得以附着ECM形成整体，介导细胞察觉环境变化并做出反应或改变环境的能力。本实验建立的是一种持续刺激模型，至初次免疫后第120天，小鼠心脏增大，心肌纤维化明显，与此同时，心肌细胞所表达的CD29也不断增加,这可解释为心肌不

7、断地对环境变化作出的反应。CD29是心肌细胞表面信号协同受体，并能调节传统受体的信号通路，包括生长因子受体、耦联G蛋白受体。在CD29激活的过程中，多种蛋白在病灶黏附带聚集形成一个由CD29调节的信号传导复合物黏着斑激酶(FAK),FAK是细胞活动的调节物，体内FAK缺乏时细胞活动性降低，FAK表达增高时细胞活动性增强。FAK磷酸化活性改变随CD29密度增加而增加。Schaller〔11〕证实CD29与特定的ECM结合后在病灶所产生的信号有助于细胞的生长、存活。Ding〔12〕等通过对主动脉狭窄的动物实验发现，在从细胞肥大到心衰的发展过程中细胞凋亡

8、和细胞表面CD29与ECM桥接的瓦解有关。本实验中，心肌细胞受外周环境的影响，CD29的表达代偿性增高。初次