复方鳖甲软肝方防治特发性肺间质纤维化的mmps表达

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1、复方鳖甲软肝方防治特发性肺间质纤维化的MMPs表达作者：段斐，耿德海，张梅，戎瑞雪，王蓓，唐志远【摘要】　　目的研究复方鳖甲软肝方对特发性肺间质纤维化防治的MMPs表达，探讨其机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只。随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组及复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组，共6组，每组30只。各组分别于7，14，28d随机抽取10只大鼠，麻醉后取肺组织，MMP-2采用原位杂交及RT-PCR的方法测定。MMP-1和MMP-9采用免疫组化的方法。结果复方鳖甲软肝方组在早期抑制MMP-9在细胞内

2、表达上调，在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调，说明两者均有抑制纤维合成的作用。MMP-2的原位杂交和RT-PCR结果一致，在模型组过度表达，在药物组表达被抑制，表明药物对IPF的形成有抑制作用，以中、小剂量组为好。结论复方鳖甲软肝方在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调，在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调，达到抗纤维化作用；复方鳖甲软肝方通过抑制MMP-2表达发挥抗纤维化的作用。【关键词】复方鳖甲软肝方；肺间质纤维化；基质金属蛋白酶家族　　Abstract:ObjectiveTostudytheef

3、fectofpoundprescriptiononaryinterstitialfibrosis)causedbyBleomycinA5.Methods180maleSDratslydividedintosixgroups:shamoperationgroup,modelgroup,positivemedicinegroups,high-dosagegroup,medium-dosagegroupandloediumgroup.Aftertheyedicine,tenratsineachgroupeach

4、timemunohistochemicalmethod.ResultsCPTScouldinhibitexpressionofMMP-9inearlyphaseandMMP-1inmiddleandlatephases.ResultofhybridizationinsituofMMP-2ilartothatofRT-PCR.Theeffectsofmediumdosegroupsandloiddleandlatephases.CPTShasaprotectiveeffectonIPFbyinhibitin

5、gtheexpressionofMMP-9.　　Keyatrix,ECM）蛋白与其它类型的蛋白一样，有合成过程也有降解过程。ECM蛋白翻译以后的修饰加工过程，以及蛋白质的降解过程，都是由酶来催化的，这些蛋白酶类属于锌内肽酶，因而称之为基质金属蛋白酶（matrixmetalprotEinases,MMPs）。MMPs来源于多种类型的细胞，其在ECM（extracellularmatrix）破坏和降解过程中具有十分重要的作用。本文主要对基质金属蛋白酶在特发性肺间质纤维化表达进行实验研究。　　1器材　　1.1药

6、物　　1.1.1防治药物复方鳖甲软肝方（内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司生产的复方中药干粉，600g/瓶，批号：20020501）。高剂量1.4g·kg-1·d-1、中剂量0.7g·kg-1·d-1、低剂量药物为0.35g·kg-1·d-1。相当于临床日用量（0.1g·kg-1）的14倍，7倍，3.5倍。　　1.1.2阳性对照药醋酸强的松0.56mg(100g-1·d-1）广东华南制药厂生产，批号011201。　　1.1.3造模药物注射用盐酸博莱霉素（bleomycin，BLM-A5），日本化药株式会社制

7、造，批号X12100。　　1.2动物SD大鼠180只，雄性，体重200～220g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物级别：SPF/VAF，许可证编号：SCXK2002-0003。饲养于同级动物房，自由饮水。购入后适应性饲养1周，进行实验分组。随机分为6组:假手术组、模型组、阳性药物对照组及复方鳖甲软肝方（以下表格中简称鳖甲方组）高、中、低剂量组。每组30只。各组均于7，14，28d随机抽取10只大鼠采血，同时取肺制成光、电镜标本。实验动物分组及给药剂量见表1。表1实验动物分组及给药剂量（略）阳性药

8、物组及复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组药物均配制成1.5ml溶液灌注;n=30　　1.3试剂　　TrizolReagent购自Invitrogen公司,M-MLVReverseTranscriptase，RT-PCR试剂盒，Trizol液购自Promega公司,TaqDNA聚合酶购自TaKaRa公司,琼脂糖购自中国科学院生物物理所生化厂，DNAMarker，DEPC，溴酚蓝，溴化乙锭，购自北京鼎国生物技术公司。SP-9002，Z