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1、麦冬水煎剂的遗传毒性研究论文.freelg(原药材)/mL4个浓度组在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下与L5178Y细胞作用3h,表达2d,制备突变频率平板并培养12d,计数大、小细胞集落的孔数,计算总突变率(MF)和小集落突变百分率(SC%)；在MNT中,每组10只ICR小鼠,雌雄各半,.freelphomaAssay(MLA)andMouseBoneMarrog(crudedrug)/mLetabolicactivation(+/-S9),thenexpressedfor2days.Themutationfrequencyplatesutation
2、frequencyandthepercentageofsmallcolonymutantsice(5males/5females)ineachgroup,themiceurbonesear.Foreachmouse,thenumberofmicronucleatedpolychromaticerythrocytes(MNPCE)in2000polychromaticerythrocyteseanrateofMNPCEineachgrouputationfrequencyofdoselevelsshoallcolonymutantsilararroutationinL
3、5178Ycellsetabolicactivation,ithintsthatthetestarticlemayhavepotentialgenotoxicityforhumanbodies.RadixOphiopogonisdecoctiondidnotshoosomedamageofbonemarroice,ithasnogenotoxicityinvivoetabolicactivation.Keyphomaassay；bonemarroicronucleustest；genotoxicity；mice麦冬具有养阴生津、润肺清心的功效,用于肺燥干咳、虚劳咳嗽
4、、津伤口渴、心烦失眠、内热消渴、肠燥便秘及咽炎等多种疾病的治疗。为使麦冬列入法国药典,进入法国销售市场,笔者受中法草药工作组之托、按照合作项目要求,在GLP管理体制下1,采用国内外遗传毒性试验指导原则2-3推荐的标准组合中的小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA)4及小鼠骨髓微核试验(MNT)5对麦冬水煎剂进行了遗传毒性研究。1材料1.1供试品麦冬原药材由中国药品生物制品检定所中药室采购,水煎剂由北京同仁堂科技发展股份有限公司制备。麦冬水煎剂为棕色液体,试验前于4℃冰箱、避光保存。MLA检测用原液浓度为2.69g(原药材)/mL；MNT检测用原液浓度为2.67g(原药材)/mL
5、。1.2阴性(溶媒)对照品MLA使用本中心PNT使用市售氯化钠注射液,批号07070641,购自天津药业焦作有限公司。1.3阳性对照品MLA的非代谢活化(-S9)试验使用甲基甲烷磺酸酯(MMS,批号12K3671)；代谢活化(+S9)试验及MNT使用环磷酰胺(CP,批号91K1176)；均购自Sigma公司。1.4细胞小鼠淋巴瘤细胞L5178Ytk+/--3.7.2C,引自日本国立医药品食品卫生研究所,液氮保存；细胞复苏后进行了支原体检查及自发突变细胞清除和自发突变率检测,合格细胞传代5次以内使用。1.5动物ICR小鼠50只,雌雄各半；微生物级别：VAF；北京维通利
6、华实验动物技术有限公司提供,许可证编号：SCXK(京)2007-0001。动物购入时周龄：7～8周；体重：雌21.8～26.4g,雄27.1～31.5g；动物购入后于本中心动物管理室检疫驯化5d。1.6培养基、试剂与染液小鼠MLA使用：①完全培养基由RPMI1640培养基(GIBCO)、0.2%resco,终浓度200μg/mL)配制而成,根据用途不同分为含10%马血清(传代培养)、含20%马血清(96孔板培养)和不含马血清(清洗、稀释)的培养液。②突变选择剂三氟胸苷(TFT,终浓度3μg/mL),批号41K1144,购自Sigma公司。③代谢活化剂S9(由苯巴比妥
7、钠与β-萘黄酮联合诱导处理大鼠肝而获得,本中心自制),实验当日与180mg/mL的Glucose-6-Phosphate、25mg/mL的NADP、0.15mol/L的KCl等辅助因子溶液,按2︰1︰1︰1(mL)的比例配制成S9混合液,1h内使用。S9在处理液中的终浓度为2%。小鼠MNT使用：①胎牛血清(天津市川贝生化制品有限公司)；②甲醇(北京化工厂)；③GiemsaStain(Sigma),临染色前用1/15mol/L磷酸缓冲液(pH6.8)配制3%Giemsa应用液；④吖啶橙(Fluka),临染色时将0.1%吖啶橙染液与1/15mol/L磷酸缓冲液(pH
