tm4sf9在大肠侧向发育性肿瘤细胞株中的表达及意义论文

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1、TM4SF9在大肠侧向发育性肿瘤细胞株中的表达及意义论文耿焱，姜泊，赖卓胜，张宏权，马文敏，王新颖【关键词】,大肠侧向发育型肿瘤ExpressionandsignificanceofTM4SF9inlaterallyspreadingcolorectaltumor【Abstract】AIM:ToinvestigatedifferentexpressionsofTM4SF9inlaterallyspreadingtumor(LST),LovoandSETHODS:mondifferentexpressiongenesamongthosecell

2、linesicroarraytechnologyandTM4SF9iquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)technologyonstratetheresultandtheadhesionabilityent.RESULTS:MicroarrayshoondifferentialexpressioninTM4SF9amongLST,S4SF9amongLST,S4SF9isoverexpressedinLovoayregulatespecificbiolog

3、icalfunctionsofLST.【Keyor;TM4SF9;proteinarrayanalysis;reversetranscriptasepolymerasechainreaction【摘要】目的：研究四分子交联体5（TM4SF9）在大肠侧向发育性肿瘤（laterallyspreadingturmor,LST）、S4SF9表达差异与三个细胞株黏附能力的关系.方法：用基因芯片技术研究3个细胞株的共同差异表达基因，从中筛选出TM4SF9作为研究对象.freelor,LST）为代表［1］.LST特点是极少向肠壁深层垂直侵犯，而主要沿黏膜表

4、面呈侧向浅表扩散［2］.LST的癌变率可达8.4%~52.0%，并可以在3年内发展成为进展期大肠癌［2，3］.我国目前对LST病变的研究尚属空白.研究LST侧向生长及高恶变倾向的分子生物学机制，有可能对早期大肠癌的发生发展过程提供有价值的资料及线索，并在分子水平上找到早期诊断的可靠依据.我们通过基因芯片研究LST,Lovo,S4SF9）作为研究对象，用半定量RTPCR验证，用黏附实验研究3个细胞株黏附性的差异与TM4SF9表达水平的关系，以探讨TM4SF9与LST侧向生长及高恶变倾向的分子生物学机制的关系.1材料和方法1.1材料大肠LST细胞

5、株为南方医科大学消化病研究所建株并保存［4］.SHMinusFirstStrandcDNASynthesisKitFermentas公司；PreMixPCR试剂盒赛百盛公司；TM4SF9基因片段引物参照基因文库NM_005723序列设计，GAPDH参照文献［4］设计，博亚公司合成，序列:TM4SF9:sense(197)5′TTGTGGTGGGAGGAGTGAT3′,antise(444)5′CTGGGTGAAGTCTATGAGGTT3′;GAPDH:sense5′CCATGGAGAAGGCTGGGG3′,antise5′CAAAGTTGTC

6、ATGGATGACC3′.3K30高速低温离心机Sigma公司；UNOIIPCR扩增仪Biometra公司；UVI凝胶成像系统CollagenISigma公司；48孔培养板Corning公司.1.2方法1.2.1细胞培养3个细胞株均在37℃50mL/LCO2条件下，培养于含10mL/L小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI1640中,每周传代2次.1.2.2基因芯片［5,.freelRNAspincolumnprotocal分离纯化mRNA.用通用测序PCR引物扩增中科开瑞科技股份有限公司所提供的18816个基因克隆作

7、为模板.表达谱芯片由2个半张大小为8cm×12cm尼龙膜组成.每半张芯片上排列384个小矩阵（16×24），每个探针在矩阵中排布2点，平均点样量20ng.正方形方阵右上角设空白点作阴性对照，每4个方阵设1个阳性对照，在选定方阵的右下方（方阵外）.整张芯片共有8个看家基因，为常见的核蛋白体蛋白、核糖体蛋白等.BG600点样仪点样，紫外交联，晾干备用.在逆转录体系中加入mRNA0.75μg，MMLV酶2μL，［a33P］dATP10μL标记，按Promega公司提供说明操作.预杂交结束后，弃去预杂交液，加入杂交液6mL，变性过的鱼精DNA（100

8、mg/L）60μL和40μL标记好的探针.置入杂交炉中68℃杂交20h.杂交后严格洗膜，测量膜正面Counts，磷屏压片72h.FLA3000扫描仪扫描芯片信号图像