异种脱蛋白松质骨复合自体mscs横突间成骨融合的作用

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1、异种脱蛋白松质骨复合自体MSCs横突间成骨融合的作用.L.编辑。作者：高春阳，孙革，韩冬梅，李罡，周斌【摘要】［目的］探讨异种脱蛋白松质骨（deprotEinizationbone,DPB）作为骨组织工程支架性能及其成骨作用。［方法］采用脱蛋白法制备异种松质骨支架，复合一定数量的自体骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)构建个体化组织工程骨。24只6～8个月龄雄性青山羊为受体制作脊柱L3、4横突间植骨模型。实验根据不同植入物分为3组：异种DPB复合一定数量的自体MSCs构建组织工程骨；单纯DPB；自体

2、髂骨。各时间段通过手检、影像学、组织学以及机械性能测试并对比分析来评价其成骨性能。［结果］异种DPB保持了天然网架结构，与山羊MSCs具有良好的生物相容性。各组材料脊柱横突间融合情况：组织工程骨植入横突间组织学表现为多点成骨，融合效果良好，不同时间段影像学与自体髂骨组基本一致。单纯DPB植入组随时间推移大部材料吸收，仅桥接骨床部有少量骨痂生成。12周后各组融合强度组织工程骨组优于单纯DPB组而接近自体髂骨组。［结论］以异种DPB为支架复合一定数量自体MSCs构建组织工程骨,其成骨能力接近于自体骨。单纯DPB成骨能力差，不能作为骨移植

3、材料。【关键词】组织工程骨；异种脱蛋白松质骨；横突间融合Abstract:［Objective］TostudythepropertiesofxenogenEIcdeproteinizedbone（DPB）usedasscaffoldinthebonetissueengineeringanditsapplicationtothespinalfusionofthelumbarintertransverseprocessinagoat.［Methods］Thedeproteinizedboneanadultpigfemoralcancel

4、lousbonethroughphysicalandchemicaltreatments.Thecell-materialplexicroscopetoevaluatetheadhesionandthegroentalmodelofthespinalfusioninthelumbarintertransverseprocessalegoatsaged6-8months,plantgraft.Allthesamplesinationsed,includingtheradiographyandthehistomorphologicala

5、ssay.［Results］Itshoaintainednaturalpore,ithardlyhadanyantigen,soithadgoodhistopatibility.Inthespinalfusionmodeloflumbarintertransverseprocess,thecell-materialplexcouldformcartilageandhadaneationinamultipointostthesameastheauto-iliumosteogenesisandhadagoodmechanicalstre

6、ngth.［Conclusion］Thexenogeneicdeproteinizedboneisagoodmaterialinthebonetissueengineering,×0.5cm×0.5cm大小，其长轴与所取松质骨骨小梁排列方向一致，取材各骨块的表观孔隙密度基本相同。参照Marts方法，骨块1∶1氯仿甲醇液脱脂24h，50℃蒸馏水震荡冲洗，20%H2O2浸渍24h。反复3次。每阶段利用倒置显微镜观察骨块大体形态结构直至骨孔内无细胞、基质等组织成分。将处理后的骨块蒸馏水于室温下浸泡透析24h，烘干。全自动氨基酸分析仪（日立

7、I-8800）测定分析羟脯氨酸、酪氨酸、色氨酸的含量。每块电子天平称重（1±0.1）g。1.2组织工程骨构建受体山羊术前三周髂骨穿刺取骨髓，梯度密度离心法分离获得骨髓间充质干细胞，经原代和传代培养扩增，调整细胞密度为1×106/ml，接种于DPB载体至饱和，置入无菌抽滤瓶，抽干空气，负压使其分布均匀，成骨诱导细胞培养液成骨诱导分化7d备用。成骨诱导细胞培养液为DMEM/F12培养基+10%胎牛血清+10－7mol/L地塞米松＋10mmol/Lβ-甘油磷酸钠＋50mg/L维生素C＋青、链霉素100μ/ml，pH7.3。1.3动物模型制

8、备和试验分组（见表1）24只青山羊随机分Ⅰ、Ⅱ两组，每组12只。术前1d禁食。氯胺酮10～15mg/kg肌注麻醉。俯卧位，腰骶部正中切口，纵形切开皮肤、筋膜，向两侧钝性剥离椎旁肌，暴露L2～5椎板并采用Luque棒内固定，暴露双侧L3