补肝养髓方对老年性痴呆模型皮质神经元 rna 和 nissl 体的定量研究论文

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1、补肝养髓方对老年性痴呆模型皮质神经元RNA和Nissl体的定量研究论文【摘要】目的：探讨补肝养髓方对自发老年性痴呆模型皮质神经元RNA和Nissl体的影响。方法：从21月龄昆明种小鼠筛选出自发老年性痴呆（记忆障碍）鼠，随机分为4组即空白对照组（老年性痴呆组）、西药对照组、补肝养髓小剂量组、补肝养髓大剂量组、另设老年学习记忆正常组（老年正常组）。用跳台实验检测学习记忆成绩；脑组织冰冻切片，细胞化学方法显示大脑皮质神经元内RNA和Nissl体，全自动显微图像分析系统定量检测相关脑区RNA和Nissl体含量。结果：补肝养髓方能显著改善自发老年性痴呆模型小鼠的学习记忆障碍，并

2、明显增高大脑皮质锥体细胞的RNA和Nissl体含量，而且其作用呈现出一定的量效关系。结论：补肝养髓方改善自发老年性痴呆模型学习记忆障碍的机理可能与促进调节其大脑皮质的RNA代谢，改善学习记忆关键脑区的神经元结构有关。【关键词】老年性痴呆；补肝养髓方；RNA；Nissl体；大脑皮质；小鼠〔Abstract〕ObjectiveToinvestigatetheeffectsofBuganYangsuiformulaontheRNAandNisslBodiesofcerebralcortexneuroninageddementiamice.MethodsSpontaneous

3、ageddementiamice21monthsoldKunmingmiceandthenlyinto4groups,namelycontrol,edicine,loulaandhigherdosageBuganYangsuiformulagroup.Inaddition,normalagedmicegroupadetofrozensection.Usingcytochemistrymethodtoshoaticmicro-imageanalysissystemtodeterminequantitatively.ResultsBuganYangsuiformulaco

4、uldimprovetheimpairmentoflearningandmemoryinspontaneousageddementiamice,anditcouldsignificantlyimprovetheRNAmetabolismofcerebralcortexneuronsasanner.ConclusionBuganYangsuiformulacouldremarkablypromotetheRNAmetabolismandimprovethestructureofneuronsrelevanttolearningandmemoryinspontaneous

5、ageddementiamice.〔KeyouseRNA是细胞内重要的生物大分子，通过指导和调控细胞内蛋白质的生物合成调控着细胞的新陈代谢1.freelg/kg，补肝养髓小、大剂量组分别予正交优化的补肝养髓方6.80g/kg及20.41g/kg，以上均研配成0.5mL液体灌胃给药，连续60d，正常对照组和老年性痴呆组均灌以等量双蒸水。1.2学习记忆功能检测给药观察第59天，灌胃1h后进行跳台训练，第60天给药1h后用MR-921型小鼠跳台实验自动记录仪以跳台试验检测学习和记忆成绩。1.3相关脑区RNA及Nissl体定性定量检测1.3.1取材切片给药观察及学习记忆检测结

6、束后，每组随机取小鼠8只，经1%戊巴比妥纳（40mg/kg体重，腹腔注射）麻醉下开胸，左心室主动脉插管结扎，生理盐水50mL冲洗，续以冷的多聚甲醛戊二醛灌注固定液（含4%多聚甲醛、0.05%戊二醛、0.1mol/L磷酸缓冲液pH7.2~7.4）灌注固定，取大脑于灌注液中后固定2h（4℃），然后入20%蔗糖缓冲液（0.1mol/L，pH7.4）中4℃24h。AO冰冻切片机冠状连续切片，片厚30m，切片收集于0.1mol/LPBS中待用。1.3.2孵育制片1.3.2.1RNA组化染色用Elias法7，8。①溶液配制：a：0.1mol/L醋酸缓冲液（pH4.1）用0.1mo

7、l/L醋酸与0.1mol/L醋酸纳按3:1混配；b：0.5%甲基绿溶液（以0.1mol/L，pH4.1醋酸缓冲液配制）；c：染色液：0.5%甲基绿10mL加派诺宁Y20mg，充分搅拌溶解，用氯仿除去杂质，4℃贮存备用。②染色步骤：a：切片下行到水；b：入染液37℃恒温培养箱1h；c：0~2℃双蒸水洗2min；d：叔丁醇洗；e：叔丁醇脱水2次，3min/次；f：二甲苯透明、中性树胶封片。对照片用Rnase液（8mgRnase溶于10mL双蒸水）37℃消化1h再入染液。1.3.2.2Nissl体染色9①切片入二甲苯脱脂2次，3min/次，下行至水；②1%