芪姑抑瘤煎药物血清对人舌鳞癌tca8113细胞抗肿瘤作用的实验研究论文

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1、芪姑抑瘤煎药物血清对人舌鳞癌Tca8113细胞抗肿瘤作用的实验研究论文【摘要】目的观察芪姑抑瘤煎药物血清(简称为QYJ)对人舌鳞癌Tca8113细胞的抗肿瘤作用。方法应用血清药理实验方法，采用SRB法和集落形成法观察药物血清对Tca8113细胞生长的影响。结果与正常空白小鼠血清相比，芪姑抑瘤煎药物血清能显著抑制培养的人舌鳞癌Tca8113细胞生长;随着给药剂量的增加，抑制作用增强，给药2～4h后的药物血清表现出更强的抑制作用，而给药8h血清对肿瘤细胞增殖无显著抑制作用。结论芪姑抑瘤煎药物血清对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有显著的抑制作用，芪姑

2、抑瘤煎对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过对肿瘤细胞的直接杀伤作用实现的。【关键词】芪姑抑瘤煎;SRB法;集落形成法;口腔鳞癌AbstractObjectivevivaldaysandincreasethesurvivalrateofpatientsachcancerandhepatocarcinomacancer，butitsmechanismandeffecttooralsquamouscellcarcinomaoreffectofserumcontainingprepareddrugsfrommousetreatedbyChineseprescr

3、iption'QiGuYiLiuJian'onhumantonguecancer.MethodsHumantonguesquamouscellcarcinomacelllineTca8ll3containingprepareddrugsonoralsquamouscellcarcinomaationasssay.ResultsTheserumcontainingprepareddrugstreatedbyQYJinhibitedthegrooreffectof'QiGuYiLiuJian'isstrongtohumantonguesquamous

4、cellcarcinomacelllineTca8ll3.Itsmajormechanismmightbedirecttoxicitytotheoralsquamouscellcarcinoma.Keyatinassay;squamouscellcarcinoma据统计资料分析.freela公司产品，用1%乙酸溶解成0.4%的溶液避光保存;RPMI1640为Sigma公司产品;小牛血清为四季青公司产品;各中药均购自黄河药市，由兰州大学药学院生药教研室鉴定。1.3细胞系人舌癌细胞株Tca8113为兰州大学中西医结合研究所库存。以含10%小牛血清的R

5、PMI1640培养液(100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素)，5%CO2，饱和湿度，37℃培养传代。1.4药物血清的制备芪姑抑瘤煎(简称为QYJ)中红芪、党参、莪术、山慈姑、射干以2：1：1：2：1的比例加等量水煎煮，浓缩为10g生药/ml的药液，冷藏备用。取Balb/C小鼠77只，随机分成11组，每组7只小鼠。禁食12h后，分别灌胃给药，设8、16、32g/kg共3个剂量组，16、32g/kg设4个时间组，共9个药物组，正常对照组灌等量生理盐水，阳性对照组灌服复方天仙胶囊(15g/kg)，给药剂量组给药2h后无菌采血，时间组给药后1、2

6、、4、8h无菌采血。血样1000r/min，离心20min取血清，56℃30min灭活，置0～4℃冰箱备用。1.5细胞培养将增殖良好处于对数生长期的细胞经0.25%胰酶及EDTA各半的消化液分散后计数，制成细胞悬液，接种于96孔板内，180μl每孔，预培养24h后，每孔加药物20μl(终浓度为配制浓度的1/10)，每孔总液量为200μl，每个药物浓度设6个复孔，并设空白对照(RPMI1640培养液和正常对照组不加药物，加等量生理盐水)，置于37℃，5%CO2，培养箱在全湿条件下培养48h。1.6SRB显色法参照Skehan3的方法细胞培养结束后，

7、取出培养板，每孔加入50%(质量体积)的三氯乙酸(TCA)50μl固定细胞，TCA的终浓度为10%，轻柔地加在每孔液面上，然后在4℃冰箱中放置1h，培养板各孔用去离子水洗涤5遍，以去除TCA。在空气中干燥后，每孔加0.4%的SRB100μl，室温下放置10～30min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，去除未结合的染料，空气中干燥后用pH为10.5，10mmol/LTris(三羟甲基胺基甲烷)溶解，在平板振荡器上振荡5min，在酶联免疫检测仪测定OD值，用空白对照调零，所用波长为490nm。将所获肿瘤细胞生长抑制率定义为药物对肿瘤细胞的体外抑制

8、率。抑瘤率=无药细胞对照孔OD值-用药孔OD值无药细胞对照孔OD值×100%1.7克隆形成试验参照文献4的方法，将生长旺盛的Tca811