饲用木聚糖酶的质量分析

《饲用木聚糖酶的质量分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、饲用木聚糖酶的质量分析摘要本文通过模拟动物摄食后胃肠道内环境的条件，对不同厂家的木聚糖酶进行耐酸和耐胃蛋白酶稳性试验。结果表明：在pH4.0，40℃保温2h后，不同的样品酶活性变化较大，损失最少的为33.4%，最大的达98.2%；经过pH4.0，每克木聚糖酶中添加的5000U酸性蛋白酶，40℃保温2h后，木聚糖酶的活性进一步降低，但损失低于耐酸试验对酶活的影响。关键词木聚糖酶耐酸性酸性蛋白酶稳定性近半年来，玉米价格一直坚挺，有些地区甚至超过麦类作物的价格。我国是小麦、大麦等麦类作物的主产国之一，并且麦类作

2、物的常规营养成分含量相对于玉米有一定的优势，越来越多的厂家把麦类及其副产品应用到畜禽饲料中，以减轻能量饲料资源紧张的压力，降低饲料成本。大量研究表明，在含有麦类作物的饲料中添加木聚糖酶可以有效的提高饲料消化吸收利用率，提高饲料转化率。随着木聚糖酶需求量的增加，不同品牌的木聚糖酶纷纷进入市场，其品质也越来越受到饲料界人士的关注。聂国兴等（2002、2004）研究底物浓度、DNS量和不同浸提方案对饲用木聚糖酶活性的影响；何为（2004）研究了在不同温度、pH值对木聚糖酶活性的影响。关于饲料中的矿物质和制粒过程

3、对酶活性的影响也有一些相关报道，黄春红等（2004），赵玉蓉等（2005）进行了金属离子对木聚糖酶活性影响的研究；付生慧（2005）于木聚糖酶在制粒工艺中热稳定性的研究等。但目前还未见有关模拟动物胃肠道，对木聚糖酶进行耐酸性和耐胃蛋白酶稳定性的报道。木聚糖酶的发酵来源复杂，酶特性差异较大。本试验通过体外模拟摄食后动物的胃肠道内环境，对木聚糖酶样品进行耐酸性和酸性蛋白酶处理，测定其对酶活的影响，分析其产品品质，为饲料厂家选择合适的木聚糖酶提供理论依据。1材料与方法1.1采样木聚糖酶从市场上购买，采集后立即干

4、燥并保存于4℃冰箱中。1.2酶活测定方法采用3,5－二硝基水杨酸法（DNS法）测定。在37℃、pH值5.5的条件下，每分钟从浓度为5mg/mL的木聚糖溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位（U）。1.3主要仪器和试剂精密pH计（0.01），自动分析电子天（0.0001g），分光光度计。燕麦木聚糖、木糖均购于Sigma公司，乙酸钠、氢氧化钠等试剂均为分析纯。1.4主要试剂的配制1.4.1浓度0.1mol/l，pH5.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液准确称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.7

5、0ml，然后加水溶解，定容至2000ml，，用0.1mol/l的乙酸溶液或0.1mol/l的乙酸钠溶液调节pH值至5.5。1.4.2浓度为10.0g/l的燕麦木聚糖溶液准确称取木聚糖1.00g，加入0.32g氢氧化钠，再加入90ml水，磁力搅拌，同时缓慢加热，直至木聚糖完全溶解。然后停止加热，继续搅拌30min，加入0.5ml冰乙酸，继续磁力搅拌，用0.1mol/l的乙酸溶液或0.1mol/l的乙酸钠溶液的pH值调节至5.5，然后再用乙酸－乙酸钠缓冲溶液定容至100ml。1.4.3DNS试剂称取3,5—二

6、硝基水杨酸3.15g，加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃。然后逐步加入100ml浓度为200g/L的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g，继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。停止加热，冷却至室温后，用蒸馏水定容至1000ml。用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存，室温下存放7天后使用。1.5木聚糖酶样品的处理

7、每份酶样称取1g左右，精确至0.001g，然后加入40ml乙酸－乙酸钠缓冲液，磁力搅拌30min，再用缓冲液定容至100ml，在4℃条件下避光保存24h。然后用离心机3000rmp/min离心10min，取上清液60mL，分成A、B、C三等份。A用乙酸溶液将pH值调至4.0；B用乙酸溶液将pH值调至4.0，再加入酸性蛋白酶，使每克木聚糖酶中酸性蛋白酶含量达到5000U。然后把A、B放在水浴锅中40℃保温振荡两h。反应结束后，立即定容至50mL，然后用乙酸－乙酸钠缓冲液稀释成几个梯度，进行测定，选择稀释的木

8、聚糖酶活力在0.04～0.08U/mL之间的测定值。1.6酶活测定1.6.1标准曲线的绘制准确吸取乙酸－乙酸钠缓冲溶液4.0ml，加入DNS试剂5.0ml，沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，用蒸馏水定容至25.0ml，制成标准空白样。分别准确吸取10.0mg/ml木糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00和7.00ml，分别用乙酸－乙酸钠缓冲溶液定容至100ml，配制成浓度为0.10～0.70mg