纯化的结核菌素衍生蛋白免疫刺激后小鼠脑内的fos表达论文

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1、纯化的结核菌素衍生蛋白免疫刺激后小鼠脑内的Fos表达论文.freel-muneresponseAbstract:AIMTofurtheridentifytheresponseofbrainar-eastotheimmunestimulus.METHODSUsingimmunohis-tochemistrymethod，-munizedmiceatdifferenttimepoints.RESULTSAt3，9，14，18，21dfolloaryimmunizationand7，14dfollomuniz

2、ation，strongFosimmunostain-inganybrainareassuchastheventrolater-almedulla，centralgray，hippocampusandneocortex.Butthepatternsatdifferenttimee，especiallyinthecingulatecortex.Fosexpressionintherightsideisstrongerthanthatintheleftsideaftersecondimmu-nization

3、anybrainareasparticipateintheinteractionofimmuneandcentralnervoussystem，andthatbrainasymmetrymightbeassociatedmuneresponse.0引言大量证据表明中枢神经系统可接受免疫刺激信息并参与对免疫反应的调节，但中枢神经系统参与免疫调节的神经核团及环路目前尚不明确.现在研究中枢神经系统调控免疫应答的方法主要包括损毁特定脑区后观察对免疫反应的影响、记录免疫应答时脑内神经元的电活动以及观察细胞因子或内

4、毒素对中枢神经系统的作用等［1］，这些研究方法由于各自的局限性不能完整地反映中枢参与免疫调节的部位.c-fos原癌基因及其编码的相关蛋白（Fos，FosB，Fra1，Fra2等）作为神经元激活的标志，近年来在神经系统形态和功能相结合的研究中得到了广泛应用［2］.借助此技术有人［3］发现icv或ip细胞因子可诱发大鼠脑内特定核团表达c-fosmRNA，但单纯用细胞因子并不能完整系统地反映免疫应答过程中中枢神经系统的反应.我们用一种胸腺依赖抗原纯化的结核菌素衍生蛋白（purifiedproteinderiv

5、edfromtu-berculin，PPD）免疫小鼠，建立免疫应答模型，观察免疫后不同时间点小鼠脑内的Fos表达，为阐明中枢神经系统参与免疫调节的部位提供线索.1材料和方法1.1材料BALB/c雄性小鼠6～8L（用于检测血中抗PPD特异性抗体的滴度），然后经左心室先灌流生理盐水10mL，再灌注用0.1molL-1PB（pH7.4）配制的40gL-1多聚甲醛50mL，立即取脑，置同样固定液中后固定3h，转入200gL-1蔗糖中4℃过夜.全脑行冠状切面的冰冻切片，片厚40μm，隔6张取1张.按ABC法行Fo

6、s蛋白染色.兔抗Fos抗体（1∶3000，SantaCruzTech.Inc.），4℃，48h;生物素化的羊抗兔IgG（1∶500，Sigma），室温3h;ABC复合物，室温3h;葡萄糖-DAB-硫酸镍胺法呈色;然后脱水，透明，封片.图1－图3略2结果实验组PPD免疫刺激后动物脑内有多个脑区可见到大量的Fos阳性神经元.初次免疫后3d，延髓腹外侧区、孤束核、蓝斑、臂旁外侧核、中央灰质腹外侧部、束旁核、前顶盖前核背侧部、后连合核、弓状核、未定带、中央杏仁核、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、下丘脑外侧核（Fig1

7、）、视上核、视交叉上核、视前区、外侧隔核、终纹床核、海马、齿状回（Fig2）有较强的Fos表达，新皮质、梨状皮质、扣带回和嗅脑也可见大量深染的Fos免疫阳性产物，双侧无明显区别.9d时大部分脑区如海马、新皮质、扣带回和下丘脑室旁核的Fos表达减弱.初次免疫后14d，除新皮质、扣带回、下丘脑室旁核的Fos表达仍然较弱外，大部分脑区的Fos表达再次增强，中缝核群也出现明显的Fos标记.18d时，下丘脑室旁核的染色明显增强，新皮质、扣带回的Fos阳性神经元仍然较少.21d时，脑内的Fos表达与18d组类似，但

8、下丘脑室旁核的Fos表达减弱.追加免疫后第7日（即初次免疫后28d），外侧隔核、终纹床核、中央杏仁核、下丘脑室旁核、海马、齿状回、新皮质的Fos表达明显增强，扣带回的Fos表达也增多，而且出现侧别差异，左侧较右侧明显为多（Fig3）.追加免疫后14d（即初次免疫后35d），脑内Fos表达与追加7d组类似，扣带回Fos表达仍为左侧强于右侧，同时丘脑腹后核也出现较弱的标记.对照组各个时间点组动物脑内仅有少量的Fos阳性产物偶见于额叶皮质、丘脑室