哌醋甲酯对大鼠脑缺血性损伤后神经再塑的影响

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1、哌醋甲酯对大鼠脑缺血性损伤后神经再塑的影响【摘要】目的研究大鼠脑缺血后哌醋甲酯对脑损伤区域及其相关部位神经再塑的影响。方法线栓法建立大鼠的大脑中动脉缺血模型(MCAO)，术后第3天起，口服灌注哌醋甲酯，采用免疫组织化学方法观察术后第7、14、28天突触素(Synaptophysin，SYN)及突触后致密物质(Postsynapticdensity-95，PSD-95)在大鼠皮层缺血灶的内、外、对侧的表达。结果哌醋甲酯可使SYN在MCAO术后的第14天出现显著增生(P＜0.05)。结论哌醋甲酯对缺血损伤后的大鼠皮层梗死区的内、外、对侧的神经再塑、突触重建有一定促进作用。【关键词

2、】哌醋甲酯；突触素；突触后致密物质；神经再塑　　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofMethyphenidateonneuronalplasticityafterfocalcerebralischemiainrats.MethodsUnilateralcerebralischemiaiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).MPHthe3thdayafterMCAO.SYNandPSD-95inedbyimmunohistochmicaltechniquesintheneocorticalregionsme

3、dialandlateraltotheinfarctionasonstratedstatisticallysignificantincreaseinthedensityofimmunoreactionat14thdayparedcontrols（P＜0.05）.ConclusionTheoccurrenceofneuronalplasticityafterfocalcerebralischemiainratscouldbeacceleratedbyMethyphenidatetreatment.　　Keyphetamine，D-AMPH)能明显提高损伤周围及对侧皮层神经的芽生

4、、突触再建以及相应的行为恢复［1］。哌醋甲酯(methylphenidate，MPH)与D-AMPH统属一类药物，它能促进中枢和外周神经末梢囊泡释放去甲肾上腺素和多巴胺，并阻断其再摄取，有临床试验显示，由于它具有抗抑郁和改善运动功能的双重作用，而被认为是一个有前途的治疗脑中风的药物［2］，本实验通过制造大鼠的大脑中动脉梗死(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)导致皮层区域缺血，以突触素(Synaptophysin，SYN)及突触后致密物质(Postsynapticdensity-95，PSD-95)免疫组织化学复合物的表达分布作为突触形成的标

5、志，探讨MPH对神经再塑的影响。　　1材料和方法　　1.1实验动物、分组及给药方法　　实验动物为第四军医大学动物中心提供，Sprague-Dam，即可造成大脑中动脉的完全阻断。假手术组的手术过程除不阻断动脉血流外，余步骤均同手术组。采用口服灌注的方法，按20mg/kg的剂量，对手术给药组及假手术给药组的大鼠口服灌注MPH，1次/日，固定于每日16：00给药，从术后第3天起至各观察时间点。　　1.2免疫组织化学法检测SYN及PSD-95　　各观察时间点的大鼠，用戊巴比妥钠(30mg/kg，ip)麻醉，40g/L的多聚甲醛灌注固定，取大脑标本，连续冠状面切片，片厚40μm，0.0

6、1mol/LKPBS清洗10min×3→浸入含3mL/LTriton×100的0.01mol/LKPBS液中30min→0.01mol/LKPBS清洗10min×3→分别入SYN1∶1000或PSD-951∶1000一抗溶液，4℃下孵育24～48h；取出入0.01mol/LKPBS清洗10min×3→分别入相应的二抗溶液(SYNRabbitA-Rabbit1∶400；PSD-95RabbitA-Goat1∶200)，室温下孵育2h→0.01mol/LKPBS清洗10min×3→浸入ABC复合物(1∶400Santa)，室温下孵育2h，硫酸镍胺加强的DAB蓝色反应法呈色，同时用

7、0.01mol/LKPBS取代一抗做空白对照。贴片、脱水、透明、中性树胶封片，光镜观察。以LEicaQ570C真彩色图象分析仪进行灰度定量分析，在损伤的内、外、对侧分别选5个高倍视野，取测定数值减去背景测定数值的绝对值进行阳性物质密度值的测算。　　1.3药品与试剂　　MPH由苏州第四制药厂生产；小鼠抗SYN单克隆抗体，效价1∶1000购自MAXIM公司；山羊抗PSD-95多克隆抗体效价1∶1000购自SANTA公司。　　1.4统计学方法　　本实验数据采用SPSS10.0软件进行统计学分析，所有数据用均数