血清脂蛋白电泳法的操作与增速论文

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1、血清脂蛋白电泳法的操作与增速论文【关键词】血清蛋白电泳法快速敏感血清脂蛋白电泳法是近些年临床上经常采用的一种检验方法，由于其分离和显色效果均不是很满意，目前不少实验室已废弃脂蛋白电泳法，改用脂蛋白胆固醇和载脂蛋白测定。在国外，脂蛋白电泳方法已商品化，在分析速度精度等方面均可满足常规应用。参照有关方法和技术1,5，我们得到了一种适合于国内常规应用的脂蛋白电泳的快速分析法。1材料和方法1.1使用试剂1.1.1电极缓冲液巴比妥钠25mmol/L，乙二胺四乙酸二钠0.94mmol/L,以1.0mmol/LHCI调Phg至8.6。1.1.

2、2凝胶缓冲液：巴比妥钠30mmol/L.freelmol/L，蔗糖146mmol/L，1.0mol/LHCL调pH至8.6（含聚乙烯吡咯烷酮K-605g/L）。1.1.35g/L琼脂糖凝胶，以凝胶缓冲液制备并分装后，贮于4℃。1.1.470g/L白蛋白溶液（北京化工厂）。1.1.5染色贮备液脂肪红7B0.6mmol/L，溶于无水甲醇中。1.1.6染色应用液取贮液5ml，滴加0.1mol/LNaOH1.0ml，用前制备。1.1.7漂染液甲醇：水＝5:2（V/V）1.2操作方法1.2.1凝胶片制备取无色透明的投影胶片（0.1mm），

3、切成80×110mm，放于水平台面上用一内径为70×95mm的有机玻璃边框压在其上，将加热融化的琼脂糖冷至50～60℃，加白蛋白至终浓度约为2g/L，混合，轻轻铺于胶片上，使胶厚度为1mm左右，胶凝固后小心去除边框。1.2.2加样用自制加样器制备样品槽6，加入血清样品3～5μl。1.2.3电泳胶片放入预冷至4～8℃的电泳槽支架上，以四层滤纸与电极缓冲液连接，每个胶片恒流40Ma，电泳至区带展开约30mm（约需20分钟，加或不加指示染料）。1.2.4染色胶片取出，于65℃左右烘干（约40分钟），放于水平盒中，加入新配的染色液覆盖整

4、个胶片表面，放3～5分钟（可据室内温度而定）。1.2.5漂洗与干燥除去胶片表面的染色液，浸入漂洗液中，轻轻摇动30秒，如所用漂洗液较少，可再换一次漂洗液洗30秒，转入65℃左右干燥（约10分钟）。1.2.6扫描测定胶片点样面向下放入扫描载板上，用软纸蘸少量水轻轻擦去胶片背面的污迹，在520nm附近扫描测定。2结果和讨论方法所得图谱清晰，区带平整，β-与前β-带分离较好，底色对测定基本无干扰，原点区无明显染料积存用本法测定146例健康人，所得参考值范围（均值±SD）分别是：52.2±5.4%、pre-β13.1±5.8%、α34.

5、0±5.6%，与有关资料结果相近2,4,.freelanInstruentsInc.Pragaonelec-trophoresissystemReferenceManual.Brea,California,20035Ciba-CornigDiagnosticsCorp.ClinicalElectrophoresisReferenceManual.Medi-field,MA,19986闪全忠.临床检验杂志，1991，9（1）：20.