血清蛋白电泳操作规程

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1、血清蛋白电泳一．项目名称血清蛋白电泳（HYDRAGELPROTEIN）二．检验方法名称琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理蛋白电泳是临床实验室中一种常用的蛋白质剖析技术。它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所带电荷数将其分离成五种片段：白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白，每一区带含有一种或多种血清蛋白质。四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（movingboundaryeectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（z

2、oneelecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。血清蛋白区带电泳是在临床实验室中常用的技术之一，可定性和/或半定量各条正常或异常蛋白区带。五．仪器（一）型号：SEBIAHYDRASYS(PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约162个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约半小时4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL7PROTEIN(E)试剂盒HYDRAGEL15PROTEIN(E)试剂盒HYDR

3、AGEL30PROTEIN(E)试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：70测试/150测试/300测试（3）货号：PN4100/PN4120/PN41402．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Packfor10×100ml（3）货号：PN4540(4)成分：柠檬酸33．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Packfor10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Packfor1×5ml（3）货号：PN4587（一）配套品质控血清（1）商标：SEBIA(2)包装规格：Packfor5×1ml（3）货号：PN

4、4783二．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。㈡将1个（用于7PROTEIN或用于15RPOTEIN）或2个（用于30PROTEIN）加样梳置于平板上，有数字的一端向上，在2分钟内完成每块加样梳的加样，每孔加10ul样品，然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。㈢选择相应的电泳程序，使用HYDRAGEL7PROTEIN（E）时选择仪器的“PROTEIN7”电泳程序，使用HYDRAGEL15/30PROTEIN（E）时选择仪器的“PROTEIN15/30”程序。㈣从包装袋内取出缓冲条，将其固定在电极支架背侧的钉上，再取出凝胶，用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体，在温控板表面下1/3处加120

5、ml[HYDRAGEL7PROTEIN（E）]或200ul[HYDRAGEL15PROTEIN（E）]蒸馏水或去离子水，将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。㈤自然放下支架，从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架，7和15个样品分析的加样梳置于支架6号位，30个样品分析的加样梳则分别置于3号和9号位，注意点样梳上的数字必须面对操作者，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。㈥电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束，打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，取出已烘干的胶片，用湿纸巾擦拭电极和温

6、控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml脱色液以及是否排空了废液瓶后，选择“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”键开始染色。㈦在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架，将烘干的胶片用光密度仪进行扫描，若希望胶片背景更加清晰，在进行扫描前可以额外增加一个冲洗步骤，程序为“WASHISOENZ/GEL”。㈧关机，在电脑系统上对扫描结果进行分析。三．参考范围白蛋白60.0～71.0%α1-球蛋白1.4～2.9%α2-球蛋白7.0～11.0%3β-球蛋白8.0～13.0%γ-球蛋

7、白9.0～16.0%一．临床意义血清蛋白是血浆中最多的固体成分，有300多种，每种蛋白均承担一定的生理功能（如白蛋白、球蛋白、补体成分等）。很多疾病可引起各种蛋白的变化，因此分析这些变化在临床上有重要意义，并可随访病情、推测预后。以下疾病在蛋白电泳图谱中可早期发现：总蛋白浓度Albα1α2βγ双白蛋白血症双峰感染综合症急性炎症N↓N↑↑N慢性炎症↓↑↑↑肝病综合症肝炎↓N↓↓↑↓↓↓↑肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓β-γ桥肝癌↓N↓↓甲胎