伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响

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1、伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响【摘要】目的:观察丁酸钠对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期及NDRG1蛋白表达的影响.方法:采用0.5mmol/L丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞,用MTT法检测处理不同时间时细胞增殖的变化，采用流式细胞仪检测细胞周期的变化，采用免疫组化方法检测NDRG1蛋白表达的变化.结果:①MTT实验结果显示，丁酸钠作用1～5d时各组吸光度均低于对照组，经统计学处理差异有显著性意义（P<0.05）；丁酸钠不同作用时间的细胞增殖抑制率分别为：1d组21.2%，3d组23.5%，5d组25

2、.6%，且随作用时间延长抑制率升高.②细胞周期检测结果为（%）:G1期细胞:对照组57.00±1.10，1d组63.10±0.78，3d组67.20±0.58，5d组69.70±0.64；S期细胞：对照组25.30±0.27，1d组20.20±0.66，3d组20.40±0.82，5d组20.90±0.50；M期细胞：对照组17.20±1.00，1d组16.70±0.69，3d组12.10±0.41，5d组9.40±0.23.各组G1期结果分别与对照组结果比较，差异有显著性意义（P<0.01）.③丁酸钠可上调NDRG1

3、蛋白表达水平，随作用时间增长蛋白表达增强.结论:丁酸钠可抑制食管癌细胞增殖，这一作用可能与NDRG1蛋白表达增加有关.【关键词】食管肿瘤；肿瘤细胞；NDRG1基因；丁酸钠　　0引言　　　　丁酸钠是一种四碳脂肪酸盐，是重要的肠道黏膜营养剂.研究证实丁酸钠能抑制胃癌、肝癌、结肠癌等肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化，改变瘤细胞形态结构及基因表达，诱导细胞凋亡［1-3］，因而丁酸钠作为一种极具潜力的抗癌药物越来越受到关注.NDRG1基因是一种与细胞分化有关的基因，升高其表达可抑制肿瘤细胞的增殖［4-5］.我们采用MTT实验及流式细胞技

4、术检测丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞后细胞增殖和细胞周期的变化，并观察丁酸钠对NDRG1表达的影响，为丁酸钠用于食管癌诱导分化治疗提供理论依据.　　1材料和方法　　1.1材料　　食管癌EC9706细胞系由中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室赠送.丁酸钠（servafEinbiochemicahEIdelberg公司），RPMI1640细胞培养基（GibcoBRL公司）,胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），羊抗人NDRG1多克隆抗体（SantaCruz生物技术公司），丫啶橙(Sigma公司)，CO2孵育箱（美国F

5、ormaScientific公司），流式细胞仪（德国PartecPAS公司），Fax250酶标仪（英国Stat公司）.　　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　将人食管癌EC9706细胞单层贴壁生长于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中，种植于含盖玻片的六孔板及75cm2培养瓶中.37℃,50mL/LCO2培养箱中培养，隔日换液，取对数生长期细胞进行试验.　　1.2.2MTT实验　　取对数生长期的EC9706细胞,调整细胞密度为7.5×107/L,按每孔0.2mL接种于96孔细胞培养板中.设空白对照组和0.5

6、mmoL/L丁酸钠实验组,每组均设10个复孔.实验终止前4h向细胞液中加入MTT20μL,细胞被染色后以二甲亚砜200μL溶解甲瓒颗粒,于酶标仪上测定A492nm.实验重复2次.细胞抑制率=［(A对照-A实验)/A对照］×100%.　　1.2.3丁酸钠处理及细胞周期检测　　用RPMI1640培养液将丁酸钠调终浓度为0.5mmol/L,对照组为不含丁酸钠的培养液.取丁酸钠作用1,3,5d的细胞爬片及对照组细胞爬片从六孔板取出后经pH7.4的PBS冲洗，800mL/L丙酮固定30min后用中性树胶黏于载玻片上，4℃保存，用于免疫

7、组化实验.分别取丁酸钠作用1,3,5d的细胞进行如下处理：培养瓶中的细胞经pH7.4的PBS冲洗后加入2g/L胰蛋白酶消化，离心后用预冷的PBS洗涤2次，加入700mL/L乙醇1.0mL固定细胞用于细胞周期测定.上机前将细胞离心洗涤制成单细胞悬液,加丫啶橙染色,暗室放置,300目尼龙膜过滤,用流式细胞仪检测细胞周期分布.　　1.2.4细胞免疫组织化学染色　　采用SP试剂盒进行免疫组化实验.按说明书步骤进行操作，DAB显色，苏木素复染，光镜观察细胞显色强度.结果判定：在高倍镜下观察免疫组化着色情况，以信号强弱评定NDRG1表达

8、的强弱.　　统计学处理：采用SPSS11.0软件进行统计学处理，数据均采用x±s表示,检验水准α=0.05.　　2结果　　2.1MTT检测不同时间的各组平均吸光度值均低于对照组，其差异有显著性意义（P<0.05，表1）；随丁酸钠作用时间延长，其抑制率升高.表1丁酸钠对人食管癌细胞EC