小鼠接种hbv外膜小s蛋白产生的细胞免疫反应论文

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1、小鼠接种HBV外膜小S蛋白产生的细胞免疫反应论文【摘要】目的研究接种基因重组乙肝病毒疫苗RHBs产生的细胞免疫反应。方法四组小鼠，腹腔分别接种0、0.65、1.25、2.5、5μgRHBs；4周后分离脾T淋巴细胞，分别检测CTL（cytotoxicTlymphocyte,CTL）及特异性增殖（Tlymphocyteproliferation）反应。结果CTL特异性释放率分别为：42.36%±19.32%、91.21%±22.97%、69.25%±24.13%、51.49%±21.661%，均高于0组小鼠CTL释放率31.21%±

2、9.23%（对照），差异均有显著性（P0.05）；0.65、1.25、2.5、5μg组小鼠特异性增殖刺激指数SI（体外刺激实验组cpm值/体外未刺激对照组cpm值分别为1.61、2.05、3.74、3.62；用精确Fisher方法分析每个小鼠CTL反应与T淋巴细胞特异性增殖反应的相关性，χ2=5.6979,P0.05，明显相关。结论接种RHBs产生特异性CTL及T淋巴细胞增殖反应。【关键词】基因重组乙肝病毒疫苗；小鼠；接种；CTL；淋巴细胞特异性增殖【Abstract】ObjectiveAimstheinductionofhep

3、atitisBvirus（HBV）specificcellularimmuneresponseiceimmunizatedice0～5μg,4munization,spleenTlymphocyteulatedinvitrophocyte（CTL）responseandspecifichelperTlymphocyte（HTL）proliferativeactivity.ResultsForCTLresponse,thepercentagesofspecificreleaseofthespleenlymphocyteingrou

4、p0.65、1.25、2.5、5（mean±standarddeviation）iceimmunizationalHBVspecificCTLresponseandHTLproliferativeactivityiceimmunizedice；inoculated；CTL；lymphocytespectificproliferation乙肝病毒（HepatitisBVirus,HBV）感染是一种危害人类健康的常见病、多发病，全世界HBV感染者有3亿人。接种HBV疫苗产生的特异性体液免疫反应对预防HBV感染有重要意义.freelg

5、/ml浓度溶解在70%乙腈/0.1%DMSO储存液中，临用前以培养液稀释。P815细胞（H-2d限制）：购自中国细胞培养中心。Na251CrO4、3H-甲基胸腺嘧啶：购自中国同位素公司。1.2方法1.2.1小鼠免疫接种小鼠按以下分组，每组10只。每个小鼠按分组腹腔内各接种不同剂量的RHBs：0组，接种5μg的PBS；1.25组，接种1.25μg的RHBs；2.5组，接种2.5μg的RHBs；5组，接种5μg的RHBs。2周后加强免疫接种1次：最后一次接种后4周，分离培养小鼠脾T淋巴细胞。1.2.2CTL反应P815靶细胞用10μ

6、g/ml特异性多肽37℃处理4h，并用100μlNa251CrO4、在二氧化碳培养箱37℃标记1h。效应细胞用含10%FCS的DMEM培养液悬浮小鼠脾T淋巴细胞，加巯基乙醇～5×10-5M、小鼠IL-2至5u/ml，二氧化碳培养箱内培养5天后，培养液冲洗2次，按50:1与104标记的靶细胞在96孔细胞培养板上反应4h，每个实验对象检测3次；离心后，取100μl上清用r-记数计检测放射性，用以下公式计算特异性释放率，CTL特异性释放率=（实验组释放的量-自然释放的量）/（最大释放的量-自然释放的量）；实验组释放的量是靶细胞与效应细

7、胞作用后靶细胞释放的同位素的量；最大释放的量是靶细胞被5%TritonX-100完全破坏后释放的同位素的量；自然释放的量是靶细胞自身在实验期间释放的同位素的量。1.2.3淋巴细胞特异性增殖实验用含10%FCS的DMEM培养液悬浮小鼠脾T细胞，加巯基乙醇至5×10-5M、小鼠IL-2至5u/ml，二氧化碳培养箱内培养5天后，用RHBs体外刺激，10天后小鼠脾T细胞用培养液冲洗2次，再用DMEM培养液悬浮，按2×104/孔加入96孔U型培养板，再用RHBs（终浓度10ug/ml）体外刺激4天，结束前18h，按0.5uCi/孔加入3H

8、-甲基胸腺嘧啶；将细胞收集在玻璃滤膜上，用液闪记数器检测放射性，每例重复3次。1.2.4T淋巴细胞特异性增殖各组小鼠脾T淋巴细胞体外未用疫苗刺激的增殖实验cpm值为对照，各组小鼠脾T淋巴细胞体外用疫苗刺激的增殖实验cpm值为实验组小鼠脾T淋巴细胞的增殖实验cpm