桑枝总黄酮体外抗炎活性及机制研究论文

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1、桑枝总黄酮体外抗炎活性及机制研究论文章丹丹凌霜，张洪平，史海霞，薛永亮，杨晓露，许锦文，卞卡【摘要】目的研究桑枝总黄酮的体外抗炎活性及其作用机制。方法IFN-γ和LPS协同造成小鼠RAAPK中的ERK信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达从而抑制NO的产量，提高细胞总抗氧化能力，同时下调COX-2、IL-1β、IL-6等炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达而发挥抗炎效果。【关键词】炎症;诱导型一氧化氮合酶;细胞因子;桑枝总黄酮;作用机制Abstract：ObjectiveTocharacterizea

2、nti-inflammativeeffectoftotalflavonesfromMorusalbaL(TFM)onRATTassayRNAexpressionandsuppressedgeneexpressionofCOX-2ayexertprotectiveeffectsagainstinflammationdamagethroughthemechanismofinhibitingexcessiveNO,reducingpro-inflammatorymediatorssuchasCOX-2,IL-

3、1β,IL-6，andincreasingHO-1expressionandenhancingtotalantioxidantability.TheinhibitionofiNOSandCOX-2expressionbyTFMmaybepartiallymediatedthroughextracellularregulatedproteinkinases(ERK/MAPK)pathmation;Nitricoxide;iNOS;Cytokines;TotalflavonesofMorusalbaL.;M

4、echanism桑枝(RamulusMori)是桑科桑属植物桑MorusalbaL.的一年生干燥嫩枝。味微苦、性平，归肝经;具祛风湿、利关节、行水气之功效，适用于风寒湿痹、四肢拘挛、脚气浮肿之病症，临床多用于治疗关节肿痛、手足麻木、瘫痪等多种疾病1。桑枝醇提物和石油醚、醋酸乙酯及正丁醇提取物处理动物炎症模型有抗炎作用2～4。临床使用经验和现代药理研究均提示桑枝具有较好的抗炎效果，但桑枝抗炎药效的物质基础和作用机制尚未阐明。过量的NO对炎症的发生发展起着关键作用，对其诱导型合酶iNOS的调控有望成为治疗炎

5、症的新策略5。致炎因子的刺激将活化巨噬细胞MAPK/ERK/NF-κB信号转导通路，细胞因子大量表达，诱导型合酶iNOS/COX-2经诱导产生大量NO和PGs,炎症介质推动级联瀑布反应，造成细胞损伤使炎症性疾病进一步恶化6。本文通过考察桑枝总黄酮(TFM)对RAorusalbaL.，购自上海养和堂中药饮片有限公司(批号：040707-8);D-101树脂购自天津南开大学化工厂;芦丁标准品，购自上海中药标准化研究中心;RAI1640、胎牛血清，购自Gibco公司。二甲基亚砜(DMSO)、脂多糖(LPS)、

6、TRIzolRNA提取试剂、阳性对照药L-NIL、TPTZ、Griess反应试剂，均购自Sigma公司;Bio-rad蛋白测定试剂、PVDF膜、100bpDNA梯度标准品购自Bio-rad公司;鼠重组IFN-γ，购自chemicon公司。蛋白梯度标准品，购自Progema公司;iNOS、p-ERK、β-actin抗体和二抗购自CellSignal公司和SantaCruz公司。ECL检测试剂购自GE公司。反转录聚合酶链式反应试剂盒购自北京博大泰克公司;引物由上海生物工程服务有限公司合成。其他试剂均为分析纯

7、。1.2仪器RotavaporR-220旋转蒸发仪，瑞士Buchi公司;MODULYOD-230冷冻干燥仪，美国Thermo公司;SpectraMAX190酶标仪，美国MD公司;D278532高速冷冻离心机，德国Hettich公司;UV21700紫外分光光度计，日本岛津公司;超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技股份有限公司;PCR扩增仪，德国Biometra公司;GIS凝胶图像分析系统，上海天能科技有限公司;单向电泳系统，美国Bio-rad公司;sMPIC2600C自动X线胶片洗片机，上海申贝。2方法2.

8、1桑枝总黄酮制备桑枝饮片由上海市食品药品检验所检验为桑枝(报告书编号：20080324)。全草加热回流(70%乙醇，80℃)提取3次，滤液减压浓缩后挥干乙醇后，获得醇提浸膏。继石油醚脱脂后取适量浸膏分散在蒸馏水中，乙酸乙酯萃取，获得的乙酸乙酯提取物用D-101大孔树脂柱吸附，以蒸馏水、稀乙醇预洗脱后，收集70%乙醇洗脱液，浓缩干燥获得总黄酮，以芦丁-硝酸铝比色法测定其纯度为61.38%。总黄酮冷冻真空干燥后-80℃保存，临用前配制。2.2细