巨细胞病毒感染的细胞微丝骨架重组异常

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1、巨细胞病毒感染的细胞微丝骨架重组异常【摘要】　　本研究探讨巨细胞病毒（CMV）感染对人胚成纤维细胞（HF）微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。用显微镜观察细胞形态，采用RT-PCR检测β-actin表达，V感染率大于95％，IE抗原主要位于胞核。受染细胞变粗、变圆，甚至脱壁，呈时间依赖性。感染后72、96小时，受染细胞内β-actin表达呈渐进性下调，差异显著（P<0.05）；96小时后胞内β-actin含量则为未感染组的（74.2±13.4）％，差异显著（P<0.05）。受染细胞内微丝排列紊乱，极性消失；细胞融合

2、，荧光强度明显减弱。结论：CMV引起细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。【关键词】巨细胞病毒；人胚成纤维细胞；β肌动蛋白；微丝　　ImpairedMicrofilamentCytoskeletalRearrangementinCytome-galovirusInfectedCells　　AbstractTheobjectiveofthisstudyegalovirus(CMV)infectiononactinandmicrofilamentinhumanembryofibroblas

3、tcells（HF）andtoexplorethepossiblerelationshipicroscopyaftertheinfectionofCMV，RT-PCRassayRNAexpressionofβ-actingene，easurethelevelofβ-actinprotEin.CMVimmediatelyearlyantigen(IE)inHFcellsmunofluorescenceassay.Microfilamentalterationinedbycytoskeletonfluorescenceprobe.Th

4、eresultsshoorethan95%ofHFcellsafterinfection，primarilylocatedinnucleus.HFcellsinfectedbyCMVchangedfromthinshuttleshapetoroundandthickballshape，evendetachedfromRNAlevelintime-dependentmanner(P<0.05).paredicrofilamentsergedandfluorescencedensityofmicrofilamentobvious

5、lyreduced.Itisconcludedthatcytomegaloviruscaninducealterationofactinandmicrofilament，aybehelpfulforCMVtoinfect，replicateandreactivateinhostcells.　　Keyegalovirus;humanembryofibroblastcell;β-actin;microfilament　　人巨细胞病毒（humancytomegalovirus，CMV）属于疱疹病毒家族成员之一，是机会性致病原体。随着异基

6、因造血干细胞移植临床应用日渐广泛，CMV激活感染引发的严重的、致命的并发症已成为造血干细胞移植失败的主要原因之一。人胚成纤维细胞（HF）是CMV的容受性细胞，病毒可在该细胞内活化复制。本研究组已发现CMV可感染多种类型的细胞，并且引起细胞内β-actinmRNA表达的下调［1-3］。本研究旨在探讨CMV对受染细胞β型肌动蛋白水平、微丝骨架功能的影响及效应的时效性，从而进一步认识CMV活化机理。材料和方法　　材料与试剂　　CMVAD169病毒株及人胚成纤维细胞系HF细胞由安徽医科大学王明丽教授惠赠，实验前经检测，无其它微生物污染。微

7、丝骨架探针Rhodamine-Phal-loidin（MolecularProbes产品），鼠抗人CMV即刻早期抗原（IE）单克隆抗体（NovocastraLaboratories产品），山羊抗小鼠FITC标记二抗（SouthernBiotech产品），山羊抗人β-actin抗体（SantaCruz产品），TRIZOL试剂盒（Gibco公司产品），M-MLV逆转录酶（上海生工公司产品）DMEM培养基及胎牛血清均为Gibco公司产品。　　CMV病毒株培养　　HF细胞在含5％胎牛血清的DMEM培养液、5％CO2、饱和湿度、37℃培养箱

8、（FormaScientific）中培养。AD169病毒在细胞内多次增殖传代以增加病毒毒力，病毒悬液-80℃保存备用。按病毒致细胞病变作用（CPE）终点稀释法在96孔培养板滴定半数组织培养感染量（TCID50）。将10TCID50的滴度CMV加于培