rhbmp┐2在体内诱导成骨中i，ii型胶原及碱性磷酸酶的表达论文

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1、rhBMP┐2在体内诱导成骨中I，II型胶原及碱性磷酸酶的表达论文.freelg的松质骨载体植入55只BALB/c小鼠的右侧股部肌袋内，分别于术后3～21d共8个时间点取材，采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的I，II型胶原进行检测;对ALP活性进行定量分析，观察rhBMP-2在诱导成骨中CollagenI，II及ALP的表达情况.结果①II型胶原的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的，但是.freelorphogeicprotein;collagenI;collagenII;alkalinephosphatase;

2、osteogenesisAbstract:AIMTostudyexpressionofcollagenI，IIandal-kalinephosphataseinosteogenesisbyrhBMP-2.METHODSpositionsofrhBMP-2（0.5mg）andcancellousbonecar-rierplantedintherightthighpouchof55BALB/cmice.InordertoinvestigateexpressionofcollagenI，IIandalkalinephosph

3、ataseinosteogenesisbyrhBMP-2，immuno-histochemistryanalysised3，5，7，9，11，14，17and21daysaftertheimplantation.Meaneasured7，14，21daysaftertheimplantation.RESULTS1.TheappearanceoftypeIIcolla-genarkers，ightstimulateexpressionofcollagenI，IIandal-kalinephosphataseinosteo

4、genesis.0引言BMP为骨基质中重要骨生长因子，它能诱导未分化的间充质细胞不可逆地分化形成软骨和骨，从而导致新骨的形成［1］.实验证明rhBMP-2有明显的诱导成骨活性［2，3］.软骨细胞、成骨细胞和骨细胞是骨组织发育过程中的三种主要细胞，II型胶原是软骨细胞合成的软骨基质中的特异性胶原蛋白，而I型胶原则为骨组织中的成骨细胞合成的特异性胶原蛋白.I，II型胶原蛋白的含量反映了软骨细胞和成骨细胞的成熟状况.碱性磷酸酶（ALP）也是成熟的成骨细胞的标志之一，其活性的高低也可反映成骨细胞的成熟状况.我们采用免疫组织化学

5、的方法对反映成骨细胞和软骨细胞形成及成熟状况的I，II型胶原进行检测;对骨组织中的ALP活性进行定量分析，以分析rhBMP-2对诱导成骨的调节作用及其机制.1材料和方法1.1牛松质骨载体的制备及复合我们选择异种松质骨作为载体［2］.取新鲜小牛四肢骨骨端，去除骨膜、骨髓、皮质骨及软骨组织后，将其松质骨部分制成4mm×4mm×4mm的骨粒，以温水冲洗，去除血污及表层油脂.1V∶1V氯仿/甲醇脱脂12h，以300mLL-1过氧化氢脱蛋白24h，以0.6molL-1盐酸完全脱钙24h（取样品测钙含量为16.31μgg-1干质量

6、），修剪成每粒（11±0.1）mg，低温冻干.将rhBMP-2（由军事医学科学院基础所惠赠）加0.1molL-1PBS溶液（pH7.4）后，用物理的方法匀浆成混悬液，按实验设计将rhBMP-2混悬液与牛松质骨载体充分混匀，真空抽吸，冻干.1.2方法雄性BALB/c小鼠55只，6～8g，分别于术后3，5，9，11和17d各处死5只作组织切片，用以测定CollagenI，II的表达情况.于术后7，14和21d各处死10只，其中5只作组织切片，5只用于测定单位组织重量的碱性磷酸酶活性.1.2.1CollagenI，II检测标

7、本以40gL-1多聚甲醛固定，然后置复合脱钙液24h，水洗，脱水，石蜡包埋，制成4μm连续性切片，collagenI免疫组织化学染色采用SABC法;collagenII免疫组织化学染色采用S-P法.1.2.2ALP活性测定对7，14和21d时间点动物取材后，清除标本表面的肌肉，称质量，置入5mL塑料管中再加入2mL生理盐水，机械匀浆，离心，取上清测标本单位组织质量的ALP活性.统计学处理:实验数据采用SPLM软件（本校预防医学系卫生统计学教研室）进行方差分析处理.2结果2.1CollagenI免疫组织化学染色术后3，5

8、和7d，I型胶原蛋白的表达为阴性.术后9d，I型胶原蛋白表达呈弱阳性，其阳性表达部位位于少数软骨细胞的胞质和胞外基质.术后11～21d，I型胶原蛋白的表达均呈阳性，其阳性表达部位位于成骨细胞的胞质及其细胞间质以及编织骨的骨基质（Fig1）.但随着骨组织的成熟，成骨细胞转变为骨细胞，表达I型胶原蛋白的细胞数量有所减少.2.2Coll