气压致离体中枢神经细胞损伤模型论文

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1、气压致离体中枢神经细胞损伤模型论文.freelodel;airpressure;propidiumio-dide;lactatedehydrogenaseAbstract:AIMToestablishamethodofculturedneuronin-jurymodelsbyhighairpressureforthestudyofinjuredcellgrouporsinglecellinthecentralnervoussystem（S）.METHODSNeuroninjuringmodeliodide（PI），cellembranesh

2、oeea-suredspectrophotometrically.RESULTSHighairpressureof1.0MPacausedneuroninjuryandgottheidealinjuringmodelbytheairpressureof1.5MPa.CONCLUSIONThismodelisappropriateforstudyingthebiochemistryandpatho-physiologyofneuroninjury.0引言大体脑损伤模型及脑损伤的研究已取得了一些进展，这些研究是作为脑器官整体状态下的研究结果.f

3、reelm3碎块.将脑碎块移入12mL试管，用平衡盐液洗涤3次，依次洗涤后使组织块充分沉降到试管底部，弃上清.加入0.25gL-1胰蛋白酶（溶于平衡盐液）10mL，37℃培养箱培养15min.将上述混悬液通过硅化的Pasteur滴管，充分捣碎组织，至得到单细胞悬液止;必要时用尼龙筛过滤.静置3～5min，使小组织块沉降至试管底并用Pasteur滴管将其除去.200rmin-1离心5min，弃上清.用培养液重新悬浮细胞，接种于培养皿，每皿接种（2.5～3.0）×106个细胞.培养2d后用含10μmolL-1胞嘧啶阿拉伯糖的培养液培养24h，然

4、后改为常规培养液.鉴定方法:用破伤风抗毒素作为标记物，免疫组织方法检测，判定神经元细胞［7］.1.2细胞损伤培养好的神经细胞贴壁，分别放置于动物加压舱中，实验用空气为人工配制压缩空气（40molL-1氮氧混合气体），实验分为A，B，C及对照组，在室温下（26℃），分别给予空气压力0.5，1.0和1.5MPa，停留5min，对照组置于自然环境中，实验后用胰酶消化细胞收集至离心管中离心待检测.1.3检测方法①细胞膜完整性检测:碘化丙啶（propidiumiodide，PI）不能穿过正常的细胞膜，当细胞膜损伤后，其通过细胞膜并与细胞核的DNA结合

5、，在荧光显微镜下显色，这种方法曾被用以检测细胞损伤［8，9］.按每毫升细胞培养液中加入浓度1gL-1的PI10μL，置室温下10min，荧光显微镜下检测并计损伤细胞数;②乳酸脱氢酶（LDH）的测定:细胞损伤后释放乳酸脱氢酶（LDH），用0.25gL-1胰蛋白酶消化实验模型的细胞，放入离心管中离心，取上清液，按岛津自动生化分析仪CL-700型的操作规程说明检测LDH活力.每组实验用二硝基甲苯（TritonX-1001mL20mLL-1）使细胞溶解，测定全部的LDH值，以计算损伤细胞的LDH百分比，分别于损伤后10，30min，2，6和24h测

6、定.统计学处理:数据以x±s表示，对数据用SPLM统计软件进行t检验和方差分析.2结果2.1细胞膜损伤PI染色，肉眼荧光显微镜下计数5个视野，荧光显色的细胞总数平均为:A组21，B组32，C组72及对照组12（Fig1～4）.计数结果显示空气压力至0.5～1.5MPa时，均造成不同程度的细胞膜损伤，且压力为1.5MPa时，损伤程度更重.图1－图4略2.2LDH测定空气压力在0.5MPa时，LDH释放百分比较对照组无明显差异（P0.05），空气压力至1.0MPa时，LDH的释放在30min后各时间点较对照组显示增加（P0.05），空气压力至1

7、.5MPa时较对照组差异明显（P0.01）.3讨论通过利用在体中枢神经系统损伤的动物模型的研究，对整个中枢神经系统损伤后的病理、生理以及神经功能变化取得了非常有意义的进展，对于功能以及行为变化的评估和损伤后总体治疗效果的研究，在体中枢神经系统损伤的动物模型是一个很有效的模型.但是，它不能够控制中枢神经系统各个细胞群的损伤并对其进行有效的观察和研究，随着细胞培养技术尤其是中枢神经细胞培养技术的进一步成熟，使得体外培养中枢神经细胞损伤模型的建立成为可能.Murphy等［10］于1993年开始用组织片及培养的中枢神经细胞进行体外损伤的实验研究已经

8、取得了一些研究成果.本实验的目的是建立一种简便、易行、可重复的体外培养脑源性细胞的损伤模型.目前体外培养细胞的损伤模型主要为两大类:第一类为机械损伤模型，包括牵拉损伤［11］即将