胆汁酸合成增加与肝d

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1、胆汁酸合成增加与肝D【摘要】　　目的：观察胆汁酸合成增多时，DBP的表达和活性的改变，从整体水平上探讨DBP在胆汁酸合成中的作用.方法：给C57BL/6J小鼠T0901317及给:ToinvestigatethephysiologicalroleofDBPinbileacidbiosynthesisthroughdeterminingthechangeofitsexpressionandactivityiceeasuredbyauto-biochemical-analysisapparatus.TheexpressionofCYP7A1andDBPmRNAatedbyet

2、ry.RESULTS:Fecalbileacids(P<0.05),themRNAexpressionofCYP7A1（P<0.05）andDBP(P<0.01),andactivityofDBP（P<0.05）inliverofC57BL/6Jmicetreatedicetreatedan公司产品；（±）-3-羟基癸酰酸、［S］-［-］-α-苯乙胺、辅酶A(HS-CoA)，L-乳酸脱氢酶(LDH)为sigma公司产品；异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、RT试剂盒为Promega公司产品；TaqDNA聚合酶为鼎国化学试剂公司产品.PCR引物由上海捷倍思

3、基因技术有限公司合成.其他常规试剂均为进口分装或国产分析纯.　　1.2方法　　1.2.1动物分组及取材将小鼠随机分为对照组和激动剂组，每组10只.两组均给予普通小鼠饲料.激动剂组用LXR激动剂T0901317灌胃（20mg/kg·d），对照组只给予T0901317的溶解剂，连续灌胃7d.灌胃第7日时，将小鼠单笼饲养，收集24h粪便，用于粪便胆汁酸测定.灌胃第8日，小鼠麻醉后，迅速取出肝脏，置液氮中，用于总RNA提取、DBP蛋白量及活性测定.　　将大鼠随机分为两组，每组10只，高胆固醇组，给以高胆固醇饲料（100g高胆固醇饲料中含有2g胆固醇，10g玉米油，88g标准饲料）

4、喂养；对照组，给以标准饲料喂养.饲养至第2周.尾静脉取血，确认CH组血胆固醇（2.729±0.757）mmol/L高于对照组（1.426±0.257）mmol/L后，麻醉大鼠，迅速取下肝脏，置液氮中，用于总RNA提取及DBP活性测定.处死大鼠前1d单笼饲养收集24h粪便，用于粪便胆汁酸测定.　　1.2.2肝脏DBP活性测定按参考　　2.2肝脏CYP7A1,DBPmRNA水平激动剂组C57BL/6J小鼠（图1A，表1）和高胆固醇组大鼠（图1B，表1）肝CYP7A1，DBPmRNA表达量均高于各自的对照组.　　A：小鼠；B：大鼠.　　图1肝CYP7A1和DBP的RT-PCR扩

5、增产物电泳（略）　　表1小鼠和大鼠肝CYP7A1和DBPmRNA的表达（略）　　aP<0.05,bP<0.01vs对照　　2.3肝脏DBP活性的改变激动剂组C57BL/6J小鼠和高胆固醇组大鼠肝脏的DBP活性（mkat/kg,n=10）均高于各自的对照组(0.25±0.045)vs(0.185±0.04)，(0.193±0.032)vs(0.147±0.042).　　2.4C57BL/6J小鼠肝脏DBP蛋白量的改变激动剂组C57BL/6J小鼠的DBP蛋白表达量（12±1.0，n=8）高于对照组（10.75±0.866，n=8，P<0.05,图2）.　　图

6、2atsuuraH,etal.PurificationandpropertiesofhumanD-3-hydroxyacyl-CoAdehydratase:Mdium-chainenoyl-CoAhydrataseisD-3-Hydroxyacyl-CoAdehydratase［J］.JBiochem,1996,120(3):624-632.　　［2］JiangLL,MiyazaotoT.PurificationandpropertiesofratD-3-hydroxyacyl-CoAdehydratase:D-3-hydroxyacyl-CoAdehydratase/D

7、-3-hydroxyacyl-CoAdehydrogenasebifunctionalprotEin［J］.JBiochem(Tokyo),1996,120(3):633-641.　　［3］Kurosaationof(24R,25R)-3alpha,7alpha,12alpha,24-tetrahydroxy-5beta-cholestan-26-oicacidcatalyzedalbifunctionalD-3-hydroxyacyl-CoAdehydratase/D-3-hydroxyacyl-CoAdehydrogena