il10对tgfβ刺激成纤维细胞转化的影响论文

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1、IL10对TGFβ刺激成纤维细胞转化的影响论文姚鲁肃吕长俊王晓芝钱知勉【摘要】目的探讨白介素10（interleukin10,IL10）对转化生长因子β（transtormgroyofibroblast,MFB)转化的影响。方法培养人胚肺成纤维细胞，根据不同的处理方法分为五组：A组加入TGFβ(5ng/ml)，B组加TGFβ(5ng/ml)+IL10（5ng/ml），C组加TGFβ(5ng/ml)+IL10（15ng/ml），D组加TGFβ(5ng/ml)+IL10（25ng/ml），E组为空白对照组（无细胞）。于72h使用MTT方法观察各组成纤维细胞增殖情况

2、，羟脯氨酸消化法检测胶原产生量，免疫细胞化学法检测平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,αSMA）的表达情况。结果B、C、D组细胞内αSMA表达量分别与A组比较.freelultiplicationsandgenerationofcollagen.MethodsHumanembryolungfibroblastsent.GroupA:treatedl,GroupB:treatedlandIL10attheconcentrationsof5ng/ml,GroupC:treatedlandIL10attheconcentrationsof15ng/ml,Group

3、C:treatlandIL10attheconcentrationsof25ng/ml,GroupE:controlgroup，culturedishesnotcontainingfibroblasts.After72hour,MTTevaluatedthesituationofcellmultiplication,hydroxyprolinedigestionexaminationdetectedthecollagengenerationandαSMAexpressionexaminatedbyimmunocytochemistry.ResultsTheαSMAexpressi

4、onoffibroblastsingroupB,groupC,.freelultiplicationofgroupCultiplication,collagenformationandαSMAexpressionoffibroblaststimulatedbyTGFβinvitro,itsinhibitoryeffectdependsonconcentration.【Keyoothmuscleactin肺纤维化为弥漫性肺间质性疾病的共同结局，细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）过度生成及异常沉积是其共同的病理学特征。成纤维细胞特别是其分化所成的以胞浆内含有平

5、滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,αSMA）为特征的肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)，可持续分泌大量ECM［1］。TGFβ(transtormgrol浓度，每孔取200μl加入96孔板中，纵向取5组（每组12孔）。A组：加入TGFβ(5ng/ml)；B组加TGFβ(5ng/ml)+IL10（5ng/ml）；C组加TGFβ(5ng/ml)+IL10（15ng/ml）；D组加TGFβ(5ng/ml)+IL10（25ng/ml）；E组：空白对照组（孔板内无细胞）［3］。干预前换无血清培养基培养细胞12h，使细胞处于静止状态。于加入试剂后

6、72h取出96孔板，每孔加入20μlMTT（5ng/ml，用无血清RPMI1640配制，过滤除菌），继续培养4h。吸去培养液，加入0.2mlDMSO,震荡5min，继续培养30min。在波长570nm处测定吸光度。1.2.2羟脯氨酸消化法检测胶原：细胞经胰酶消化后，加6孔板中，分组及干预方法同上。于加入试剂后72h终止作用，收集细胞上清液0.25ml于测定管中，空白管和标准管中分别加0.25ml双蒸水和标准液。三个管中分别加0.05ml的消化液，再分别加入羟脯氨酸检测试剂盒中试剂一0.5ml，混匀，室温静止10min，分别加入试剂二0.5ml，混匀，室温静置5min，分别加入试剂三1.

7、0ml，混匀，60℃水浴15min，流失冷却后，3500r/min离心10min，取上清在550nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。羟脯氨酸量=（测定管吸光度-空白管吸光度）/（标准管吸光度-空白管吸光度）乘以标准管浓度。1.2.3IL10对成纤维细胞转化的影响:细胞消化计数后接种于底部放置盖玻片的6孔板中，待细胞贴壁后换成无血清培养基培养12h。分组及干预方法同上。于加入试剂后72h终止作用，收取盖玻片，洗涤、固定细胞，行αSM