肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响

《肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响作者：沈建新，陈耀文，王海燕，韩太真【关键词】钙释放RegulationofsarcoplasmicreticulumCa2+contentdepletiononcardiacCa2+release　　【Abstract】AIM:Tosystematicallyinvestigatetheeffectsofsarcoplasmicreticulum(SR)Ca2+contentdepletiononcardiacCa2+release.METHODS:Thapsigargin,apotentSRCa2+pumpinhibi

2、tor,atedbytraditionalcaffEinepuff.TheglobalCa2+releaseulationandtheintracellularCa2+signalicroscope.RESULTS:Theresultsshoedependentmanner.TheintracellularCa2+releasedecreaseduchhigherCa2+inSRthaninplasma),onlylittleornoCa2+releasecouldbetriggeredbyfieldstimulation.CONCLUSION:Theresul

3、tssuggestthatSRCa2+contenthassomeimportantnonlinearregulatoryeffectonintracellularCa2+release.　　【Keyicroscopy,confocal;sarcoplasmicreticulum;myocardium/cytology　　【摘要】目的：较系统地研究肌浆网(SR)内钙容量的减少对心肌细胞钙释放的影响.方法：采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin（TG）耗减SR内钙容量，以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量，以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放.胞内钙信号的变

4、化均采用激光共聚焦显微镜的方法记录.结果：SR钙泵抑制剂TG以剂量依赖和非线性的时间依赖方式引致心肌细胞SR内钙容量的耗减，而钙容量的耗减可相应地引起全细胞水平的钙释放减少.但二者的变化不完全平行，SR内钙容量的少量减少即可引起胞内钙释放的显著减少，而当SR内钙耗减到一定程度后（虽然此时SR内Ca2+仍远高于胞质内钙），场刺激已很难或无法引致钙释放.结论：心肌细胞SR内钙容量对胞内钙释放具有重要的非线性调节作用.　　【关键词】钙释放；显微镜检查，共焦；肌浆网；心肌/细胞学　　0引言　　　　在心肌细胞中，胞内钙的大量释放负责启动粗细肌丝的相对滑行，进而导致细胞收缩

5、，是兴奋收缩耦联过程中的关键环节［1］.钙释放量在很大程度上决定于肌浆网内钙容量的多少［1,2］.在生理条件下，心肌细胞产生的钙瞬变（calciumtransients）中，约有92%的钙来自肌浆网（sarcoplasmicreticulum,SR）［2］.SR内钙增多可提高SR释放钙的敏感性从而增加钙释放量［3］.但SR钙容量减少对钙释放的影响则未见系统研究.我们采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin(TG)耗减SR内钙容量，以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量，以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放，较系统地研究了SR内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响如

6、下.　　1材料和方法　　1.1材料　　心室肌单细胞，取自成年SD大鼠，2~3mo龄，体质量200~300g.采用通用的标准酶解分离技术［4］分离.　　1.2方法　　心肌单细胞与钙荧光指示剂fluo4AM（15μmol/L）（MolecularProbes,Inc.）共同孵育5min后以正常胞外液灌流10min，除去胞外多余的荧光染料并使进入胞内的fluo4AM除去AM基团.适合进行实验的细胞具有如下特点：横纹清晰，呈杆状，表面干净平整，无自发收缩［4］.加载好荧光染料的细胞置于ZEIssLSM410倒置共聚焦显微镜系统的载物台上.共聚焦显微镜的成像方式为线扫描，

7、采样速率为2.09ms/线，空间分辨率为0.31μm/像素.扫描线位于细胞长轴纵向正中切面的中央（注意避开细胞核）.在有TG存在的情况下，任何一个选定的细胞都只受到一次局部场刺激或被喷一次咖啡因，同时以线扫描的方式记录一幅钙瞬变图像.所有实验均在室温23~25℃下进行.在减少SR内钙容量的实验过程中，钙泵抑制thapsigargin(TG,购自CalbiochemNovabiochemCorp）随细胞外灌流液作用于心肌细胞.灌流液的成分为（mmol/L）：137NaCl,1CaCl2,4.9KCl,1MgCl2,1.2NaH2PO4,15glucose和20HE

8、PES；pH用NaOH调