脑胶质瘤患者自体免疫治疗前后ｔ细胞亚群的变化论文

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1、脑胶质瘤患者自体免疫治疗前后Ｔ细胞亚群的变化论文【摘要】目的探讨脑胶质瘤患者自体免疫治疗的临床应用，观察该治疗对T细胞亚群水平的影响。方法试验组21例脑胶质瘤患者接受自体树突状细胞免疫治疗，对照组19例接受常规治疗，进行临床随访并检测两组T细胞亚群水平的变化。结果试验组中位生存时间（29个月）远大于对照组（10个月），两组生存曲线分布差异有显著性意义（P0.05）。脑胶质瘤患者外周血中CD3+含量、CD4+含量以及CD4+/CD8+比值明显低于正常对照组(P0.01)，免疫治疗后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+含量以及CD4+/CD8+比值

2、与对照组比较均增加（P0.05），但CD4+/CD8+比值仍低于健康成人组（P0.05）。结论脑胶质瘤存在免疫功能抑制，自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗可一定程度重建、增强机体肿瘤免疫应答.freel)15分钟，取上清液低温－20℃保存备用。抽取病人外周血50ml，离心法分离出单核细胞层，加入粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）及白细胞介素4（IL4）进行培养。于第2、4、6d向DC培养液中加入GMCSF，并在第2d加入肿瘤组织匀浆上清液与DC共同培养7d，即获得自体DC肿瘤疫苗。1.2.2治疗方案试验组采用自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗方案

3、（肿瘤疫苗静脉输注，其后辅以免疫佐剂卡介苗和20%甘露醇），并于术后7d、１个月、２个月、３个月，按上述方案进行免疫治疗共4次；对照组术后仅接受常规剂量放疗。1.2.3随访及统计分析所有病例均进行治疗后随访，并应用统计软件（SASv8）对随访资料进行生存分析。1.3外周血T淋巴细胞亚群检测1.3.1样本采集试验组和对照组外周静脉血样本采集时间均为术前3d，术后第7d，术后1个月，术后3个月。1.3.2检测方法清晨空腹采外周静脉血2ml,EDTA抗凝，加入等体积红细胞裂解液,充分混匀，10min后离心（1500rpm）5min，弃上清。加入PBS液

4、2ml重悬，离心（1500rpm）5min。加入PBS液并调整制备成浓度为1×106/ml的单细胞悬液。实验采用直接免疫荧光法，取上述悬液100μl，加入CD4FITC/CD8RPE/CD3CyQ三标荧光抗体（IQProducts公司）25μl,振荡混匀，室温避光孵育30min，后PBS液洗涤一次，再加入PBS液1ml，上样检测。流式细胞仪FACScan(BectonDickinson公司)检测,并用CellQuest软件进行分析，获得各细胞亚群的百分数。1．3．3统计学处理数据均以±s表示,采用ｔ检验,P0.05有显著性意义。2结果2.1病

5、例分组临床资料对照分析统计分析显示三组年龄和性别分布均无显著性差异，试验组与对照组肿瘤病理分级的差异无显著性意义（P0.05）。2.2生存分析试验组的中位数生存时间为29个月；对照组的中位数生存时间为10个月。LogRank法检验和HC抗原表达的减少和共刺激信号的缺乏。树突状细胞是一类具有很强抗原递呈作用的辅佐细胞,可用来增强肿瘤细胞免疫原性2。本研究采用的自体树突状细胞肿瘤疫苗属主动性特异性免疫治疗。此方法在体外扩增DC，肿瘤冻融抗原与DC共培养，并回输体内3。可一定程度加强肿瘤细胞免疫原性，诱导CD8+细胞毒性T淋巴细胞大量增生，产生对胶质

6、瘤细胞的特异细胞毒作用，外周血循环中的CD8+T淋巴细胞可显著增加。研究表明树突状细胞与肿瘤细胞的融合疫苗可以在体内有效致敏CD4+和CD8+T淋巴细胞4。动物实验表明，经肿瘤细胞冻融裂解物致敏的树突状细胞免疫治疗的荷瘤大鼠生存期明显延长,外周血中CD8+T淋巴细胞比例增加5。Yoshida等6应用DC肿瘤疫苗治疗19例颅内恶性肿瘤（12例肺癌脑转移，7例高级别星形细胞瘤），并通过51Cr释放和淋巴细胞增殖实验证实了DC肿瘤疫苗可增强T细胞针对同种肿瘤的杀伤并促进T淋巴细胞的增殖。Yu等7在DC肿瘤疫苗早期临床试验中发现，免疫治疗后再次手术患者的

7、肿瘤组织中存在细胞毒性T淋巴细胞和记忆型T淋巴细胞。卡介苗（BCG）为常用的免疫治疗佐剂，是一种有效的生物反应调节剂，具有很强的免疫原性，最早被用于膀胱癌的治疗。BCG能刺激机体免疫系统产生免疫反应，促进淋巴细胞分化、增殖，激活机体的免疫细胞产生细胞因子，发生抗肿瘤效应。BCG能有效地增加外周血CD4+T细胞的数量及功能8。本研究结果中CD3+和CD4+的增加可能源于BCG的非特异性抗肿瘤作用。本研究中免疫治疗后CD4+/CD8+比值依然低下，考虑为在肿瘤释放的免疫抑制因子作用下辅助性T细胞和抑制性T细胞的比例失衡所致。本研究所采用的自体免疫治疗

8、方法可增强肿瘤抗原提呈，激活肿瘤特异性杀伤细胞，并刺激机体产生非特异性抗肿瘤免疫反应，从而引起外周血T淋巴细胞亚群产生相应变化。自体树突