脑胶质瘤患者自体免疫治疗前后ｔ细胞亚群的变化

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1、脑胶质瘤患者自体免疫治疗前后Ｔ细胞亚群的变化【摘要】目的探讨脑胶质瘤患者自体免疫治疗的临床应用，观察该治疗对T细胞亚群水平的影响。方法试验组21例脑胶质瘤患者接受自体树突状细胞免疫治疗，对照组19例接受常规治疗，进行临床随访并检测两组T细胞亚群水平的变化。结果试验组中位生存时间（29个月）远大于对照组（10个月），两组生存曲线分布差异有显著性意义（P<0.05）。脑胶质瘤患者外周血中CD3+含量、CD4+含量以及CD4+/CD8+比值明显低于正常对照组(P<0.01)，免疫治疗后患者外周血CD3+、CD4+、C

2、D8+含量以及CD4+/CD8+比值与对照组比较均增加（P<0.05），但CD4+/CD8+比值仍低于健康成人组（P<0.05）。结论脑胶质瘤存在免疫功能抑制，自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗可一定程度重建、增强机体肿瘤免疫应答，抑制脑胶质瘤的复发和进展，从而有效地延长脑胶质瘤患者的生存时间。【关键词】脑胶质瘤树突状细胞免疫治疗生存分析T淋巴细胞亚群0引言肿瘤的免疫治疗是近期兴起的、极具应用前景的辅助治疗手段。该方法针对机体肿瘤免疫功能低下的情况，于一个或多个环节增强肿瘤免疫反应，从而抑制肿瘤发展，延长患者生存时间[

3、1]。本研究开展脑胶质瘤自体树突状细胞（dendriticcell，DC）肿瘤疫苗临床试验研究，并检测免疫治疗对患者T淋巴细胞亚群的影响。1资料与方法1.1病例资料2001年2月～2003年4月期间经病理证实的脑胶质瘤手术患者40例，随机分为试验组和对照组。试验组21例（男性12例、女性9例，平均年龄39.1岁；星形细胞瘤II级6例、III级8例、IV级7例），对照组19例（男性10例、女性9例，平均年龄38.5岁；星形细胞瘤II级6例、III级7例、IV级6例）。健康体检者12例作为正常对照组（男女各6例，平均年龄37.

4、7岁）。所有脑胶质瘤患者均经同一手术组成员手术治疗，均为术中肉眼全切肿瘤，所有病例均接受常规剂量的放疗，均未接受化疗。1.2自体树突状细胞肿瘤疫苗的制作及治疗方案1.2.1自体树突状细胞肿瘤疫苗的制作将手术切除的肿瘤标本，不加抗冻剂，立即超低温－85℃保存。1周后复温灭活，制成肿瘤组织匀浆，高速离心(2000rpm)15分钟，取上清液低温－20℃保存备用。抽取病人外周血50ml，离心法分离出单核细胞层，加入粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）及白细胞介素4（IL4）进行培养。于第2、4、6d向DC培养液中加入G

5、MCSF，并在第2d加入肿瘤组织匀浆上清液与DC共同培养7d，即获得自体DC肿瘤疫苗。1.2.2治疗方案试验组采用自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗方案（肿瘤疫苗静脉输注，其后辅以免疫佐剂卡介苗和20%甘露醇），并于术后7d、１个月、２个月、３个月，按上述方案进行免疫治疗共4次；对照组术后仅接受常规剂量放疗。1.2.3随访及统计分析所有病例均进行治疗后随访，并应用统计软件（SASv8）对随访资料进行生存分析。1.3外周血T淋巴细胞亚群检测1.3.1样本采集试验组和对照组外周静脉血样本采集时间均为术前3d，术后第7d，术后1个月，

6、术后3个月。1.3.2检测方法清晨空腹采外周静脉血2ml,EDTA抗凝，加入等体积红细胞裂解液,充分混匀，10min后离心（1500rpm）5min，弃上清。加入PBS液2ml重悬，离心（1500rpm）5min。加入PBS液并调整制备成浓度为1×106/ml的单细胞悬液。实验采用直接免疫荧光法，取上述悬液100μl，加入CD4FITC/CD8RPE/CD3CyQ三标荧光抗体（IQProducts公司）25μl,振荡混匀，室温避光孵育30min，后PBS液洗涤一次，再加入PBS液1ml，上样检测。流式细胞仪FACSca

7、n(BectonDickinson公司)检测,并用CellQuest软件进行分析，获得各细胞亚群的百分数。1．3．3统计学处理数据均以±s表示,采用ｔ检验,P<0.05有显著性意义。2结果2.1病例分组临床资料对照分析统计分析显示三组年龄和性别分布均无显著性差异，试验组与对照组肿瘤病理分级的差异无显著性意义（P>0.05）。2.2生存分析试验组的中位数生存时间为29个月；对照组的中位数生存时间为10个月。LogRank法检验和Wilcoxon法检验的结果显示，两组生存曲线分布差异有显著性意义（P<0.0

8、5），见图1。图1两组的生存分析曲线2.3外周血T淋巴细胞亚群分析2.3.1健康成人组与脑胶质瘤患者比较脑胶质瘤患者CD3+、CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+比值明显低于正常对照组(P<0.01)，见表1。表1健康成人组与脑胶质瘤患者Ｔ细胞亚群比较2.3.2脑胶质瘤患者手术前后比较脑胶质瘤