多种化疗药对凋亡抑制蛋白survivin在hl

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1、多种化疗药对凋亡抑制蛋白Survivin在HL作者：吴耀辉，邹萍，刘芳，张敏，陈建华【摘要】Survivin基因是细胞凋亡抑制蛋白家族的新成员，由于其具有在人类正常组织不表达而在各种肿瘤组织高表达的特性，因此有望成为肿瘤治疗的选择性靶点；有研究还表明survivin的表达与耐药性的发生有关。本研究旨在通过查明HL-60细胞在多种化疗药物作用后mRNA和蛋白的改变，初步探讨survivin和耐药性之间的关系。用合适浓度的柔红霉素(DNR)、米托蒽醌(MIT)和三氧化二砷(As2O3)作用于HL-60细胞，随后

2、用RT-PCR检测给药的第1天和第3天HL-60细胞中survivinmRNA的表达情况，用IT组下降40%(P<0.01)，As2O3组下降了25%(P<0.01)。在给予化疗药的第3天，DNR和MIT组的HL-60细胞中survivinmRNA表达较第1天有明显的升高，分别上升20%(P<0.05)和65%(P<0.01)；但给予As2O3组中的survivinmRNA表达仍持续降低，仅为第1天的68%(P<0.01)。IT3天后的HL-60细胞中survivin蛋白含量分

3、别升高了14%和11%，而给予As2O3组则下降了82%。结论：在给予化疗药后白血病细胞survivin表达先降低后升高的现象可能与化疗中耐药性的发生有关，而三氧化二砷有着不同的作用机制，这在逆转耐药性上可能发挥重要的作用。【关键词】柔红霉素　　AlterationofExpressionofSurvivininHL-60CellsTreatedotherapeuticDrugs　　AbstractSurvivin，aneemberoftheinhibitorofapoptosisprotEin(IAP)f

4、amily，expressedinthemosthumancancersbutnotinterminallydifferentiatedadulttissues，sosurvivinmaybeatargetfortumortherapy.Inaddition，somescholarsfoundthatsurvivinexpressionisassociatedotherapy.ToexploretherelationshipbetRNAandprotEInofHL-60cellstreatedycin(DN

5、R)，mitoxantrone(MIT)andarsenictrioxide(As2O3)RNAandsurvivinproteinRNAlevelsalldecreasedafterthefirstdayoftreatmentRNAtreatedentotherapeuticdrugs，thesurvivinleveldescendedatfirstdayandthenascendedobviously.Thisphenomenonmaybeassociatedotherapyforleukemia.On

6、theotherhand，As2O3shoechanismthatmayplayasignificantroletoreverseresistance.　　Keyycin;mitoxantrone;arsenictrioxide;survivin;HL-60cell　　细胞凋亡受阻在肿瘤的发生、发展及肿瘤化疗耐药等方面占有重要的地位。近年来的研究表明，细胞凋亡调节的改变可能是肿瘤化疗耐药发生的原因之一［1］。Survivin作为细胞凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein，IAP

7、)家族的新成员，由于其具有在人类正常组织不表达，而在人类各种肿瘤组织高表达的特性［2］，有望成为肿瘤治疗的选择性靶点，引起了学者们的广泛关注。化疗在目前仍然是治疗白血病的主要方法，但日益增多的耐药性的出现严重影响了治疗的疗效，而耐药性发生机制目前尚不十分清楚。我们通过研究多种化疗药物作用人急性髓性白血病细胞系HL-60后survivinmRNA和蛋白的变化，初步探讨survivin和化疗耐药性之间的关系。　　材料和方法　　材料与试剂　　RPMI1640培养液、新生牛血清、TRIZOL试剂购自Gibco公司，

8、MMLV逆转录酶、RNA抑制物为Promega公司产品，DNA聚合酶购自日本TaKaRa公司，兔抗人survivin多克隆抗体为SantaCruz公司产品，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG购自北京中山生物工程公司，β-actin和survivin的引物由上海生物工程公司合成，人急性髓性白血病细胞株HL-60由华中科技大学同济医学院免疫教研室惠赠，柔红霉素(daunomycin，DNR)为法玛西亚普强有限公司产品，