人子宫蜕膜树突状细胞 dec

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1、人子宫蜕膜树突状细胞DEC作者：祝文峰袁建辉曾国琼李红梅【摘要】目的：探讨人子宫蜕膜树突状细胞的分离方法和诱导培养的最佳条件，为研究树突状细胞在母胎免疫耐受中的作用奠定基础。方法：人早孕（7~12周）子宫蜕膜组织经机械破碎，梯度离心获得蜕膜低密度细胞，经粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和干细胞因子（SCF）诱导，所获得细胞用FITC标记的抗人DEC-205、HLA-DR、CDllc抗体进行鉴定。结果：从蜕膜组织可获取足够数量蜕膜树突状细胞，体外培养10~18d细胞生长较为活跃，第14天左右达到最高值，维持3~4d开始下降，20d内细胞数仍能维持在（1.0~2.3）×10

2、5个/mL。结论：梯度离心法能成功分离蜕膜树突状前体细胞，GM-CSF和SCF体外诱导可提供蜕膜树突状细胞原代培养较为满意的生长条件。【关键词】妊娠；免疫耐受；蜕膜；树突状细胞；分离和纯化〔Abstract〕ObjectiveToinvestigatetheseparationmethodsandgroechanisminmaternalimmunityandtolerancetothefetus.MethodsThefreshearlygestation(7~12echanicallyinHank'Sbalancedsaltsolution,andtheloacrophage

3、colony-stimulatingfactor(GM-CSF)andstemcellfactor(SCF).Thenthegeneratedcellsethods.ResultsAtotalof1.0~2.3×105decidualdendriticcellsthefreshdecidualtissue.Thesecellsgreethodofechanically,gradientcentrifugationcansuccessfullyseparatethedecidualdendriticcells.GM-CSFandSCFcanpromotethegro.〔Key-C

4、SF）和干细胞因子（SCF）诱导其大量生长，为后续研究树突状细胞在母胎免疫耐受中的作用奠定了基础。1材料和方法1.1材料人早孕（7~12周）子宫蜕膜组织（本院门诊要求终止妊娠的组织标本）。D-Hanks'（平衡盐溶液），配制方法见2.2细胞生长曲线见图1。蜕膜细胞接种后，数量均有一明显下降，第5天达最低值，可能是细胞悬液中蜕膜细胞死亡所致。体外培养10~18d蜕膜树突状细胞生长较为活跃，第14天左右细胞数达到最高峰值，维持3~4d后开始下降，但20d内细胞数仍可维持较高水平。在细胞培养液中加入GM-CSF、SCF诱导后与对照组比较，蜕膜树突状细胞数量均有不同程度增加；其中二者合

5、用诱导后蜕膜树突状细胞数量增加最为明显；三者在培养10~18d均能获得足够数量（1.0~2.3×105/mL）蜕膜树突状细胞。2.3蜕膜树突状细胞的形态和生长变化倒置显微镜观察蜕膜树突状细胞体外培养最初呈圆形或卵圆形，7~9d后出现典型分裂相，胞质内可见二倍体核型；10~11d细胞分裂旺盛，相互聚集有贴壁现象；14d左右细胞贴壁，胞膜向外延伸出尖状突起，胞质中见圆形或卵圆形细胞核，细胞生长呈簇状聚集，此状态可持续到第18天左右。此后细胞分裂逐渐减慢，活细胞开始离解和死亡，至第21天左右细胞明显减少，第28天细胞完全死亡。形态学观察表明：原代培养的蜕膜树突状细胞在10~18d生长

6、和分裂能力很强，此后逐渐衰退，最长可达28d。2.4蜕膜树突状细胞鉴定免疫荧光观察显示为阳性反应，即所培养的细胞是蜕膜树突状细胞DEC-205+HLA-DR+CD11c+。3讨论妊娠以后母体免疫系统发生若干变化，如Th1/Th2系统向Th2偏移，NK细胞毒性下降CD4+CD25+调节性T细胞增多[4]等，母胎界面也形成了免疫耐受的微环境。可见母胎免疫耐受不是被动的不识别胚胎抗原，而是一个主动识别和耐受的过程。而母体对胚胎抗原的识别必然离不开抗原递呈细胞—树突细胞。因此，树突细胞对母体免疫耐受的启动起着重要作用。Gardner等[1]对人蜕膜中树突细胞的表型和分布进行了研究，发现

7、在早孕期蜕膜中存在HLA-DR+lin-（即CD3-CD19-CD14-CD56-CD16-）的树突细胞，并且为未成熟型，主要特点为HLA-DR+CD11c+DEC-205+CD40+DC-sign-CD1α-CD123-，并认为DEC-205+可作为蜕膜树突细胞的标志。免疫组化显示DEC-205+的树突样细胞散在分布于蜕膜中，在种植部位可见其与滋养细胞很接近。Blois等[5]对孕鼠子宫局部及外周血中的树突细胞在孕期的变化进行研究发现：①CD11c+树突细胞在孕5.5d开始上升，8.5d达