压力超负荷性肥大心肌细胞at1和at2 mrna表达的动态变化论文

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1、压力超负荷性肥大心肌细胞AT1和AT2mRNA表达的动态变化论文【摘要】目的：观察压力超负荷性肥大心肌细胞表面AT1和AT2受体mRNA表达的动态变化.方法：构建压力超负荷性心肌肥大模型，于不同时间点急性分离心肌细胞.采用RTPCR法观察肥大心肌细胞中AT1和AT2mRNA表达的动态变化.结果：随着大鼠心肌肥厚程度的逐渐加重，于术后4RNA的表达水平较之假手术组均逐渐升高，8RNA的表达呈现动态的变化过程.表达增多的AT2受体可能会在随后心力衰竭的发生中发挥一定作用.【关键词】心肌细胞受体血管紧张

2、素II1型受体血管紧张素II2型0引言目前已发现细胞表面主要存在着血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的两种受体.freelRNA表达的动态变化及与心肌肥大之间的相互关系，以期进一步深入理解两型受体在心肌肥大发生中的作用及其机制.1材料和方法1.1材料雄性SD大鼠36只，体质量220～250g（西安交通大学实验动物中心).AngⅡ，collagenaseⅠ，protease及BSA（Sigma公司）.Trizol及Taq酶（Promega公司），dNTPs及100bpDNALadder（华美生物工程公司）.引物

3、由上海康成生物技术有限公司合成.其它试剂均为进口或国产分析纯.1.2方法1.2.1压力超负荷性心肌肥大模型的构建将实验动物随机分为2组各18只，腹主动脉缩窄组于左肾动脉上方小心分离长约3mm的腹主动脉，套以内径为0.8mm的银夹造成缩窄；假手术组除不以银夹缩窄腹主动脉外，其余操作同腹主动脉缩窄组.术后分别饲养4in后，在置换上清液的同时梯度恢复溶液中Ca2+的浓度.此过程重复3~4次后，基本去除所含非心肌细胞［4］.提取部分心肌细胞,使用目镜测微尺测量心肌细胞横径（TDM）.高倍镜下（10×40）随

4、机选取20个视野,计算其中杆状心肌细胞横径，取其均值为该例左心室心肌细胞横径（LVTDM）.1.2.3RTPCR一步法提取细胞总RNA，逆转录成cDNA，PCR扩增.条件为：94℃变性1min,退火1min.72℃延伸1min，共30个循环，而后于72℃再延伸5min.引物序列、产物长度如下所示.βactin：正义链5′CCTGTACGCCAACACAGTGC3′，反义链5′ATACTCCTGCTTGCTGATCC3′，211bp；AT1：正义链5′CAGCCGTCATCTACCGAAAC3′，

5、反义链5′AGGAAAGGGAACACGAAGC3′,142bp；AT2：正义链5′ATCTGGCTGTGGCTGACTT3′,反义链5′AGCATATTTCTCAGGTGGG3′，362bp.以βactin作为内参照，用二者凝胶成像后的灰度值与βactin相比，代表其相对表达水平.统计学处理：数据以x±s表示，GraphPadPrism统计软件分析，不同时间点的LV/B，AT1和AT2mRNA的表达变化分析采用双因素方差分析，各组间相互比较采用t检验，P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1

6、左心室质量/体质量及心肌细胞横径大鼠腹主动脉缩窄术后4，8，12RNA的表达水平于术后4RNA的表达水平(0.505±0.059)与8RNA的表达水平从0.438±0.088进一步升高至0.580±0.066，差异有显著性.各时段假手术组心肌细胞中AT1与AT2mRNA的表达水平均无明显变化（P0.05，图1,2).3讨论目前的资料表明，AT2受体的作用较为复杂有时甚至是相互矛盾的.研究结果提示AT2在细胞和组织中的作用与当时的特定环境密切相关［5］.因此，分离并观察压力超负荷性肥大心肌细胞AT1与

7、AT2表达的动态变化，对于研究其在压力超负荷性心肌肥大过程中的作用是非常必要的.有关资料显示：正常成年大鼠心肌细胞AT2处于较低水平，心肌肥厚时AT2表达增加，AT1表达增加或降低的幅度趋缓［6］；心肌梗死后AT2与AT1(主要是AT1α)均明显上调［7］.我们的结果表明：正常情况下，成年大鼠心肌细胞上AT1与AT2mRNA均处于较低水平.随着大鼠心肌肥厚程度的加重，AT1mRNA的表达水平于术后4anhearts［J］.BasicResCardiol,1998,.freeliH,etal.Effe

8、ctofangiotensinIItype1receptorblockadeoncardiacremodelinginangiotensinIItype2receptornullmice［J］.ArteriosclerThrombVascBiol,2002,22(1):49-54.［3］CareyRM,.Roleoftheangiotensintype2receptorintheregulationofbloodpressureandrenalfunction［J］.