大黄素抑制hl60-adr耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用论文

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1、大黄素抑制HL60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用论文陈英玉，郑合勇，胡建达，郑志宏，郑静，连晓岚，吕联煌【摘要】本研究探讨中药大黄素（emodin）对人白血病耐药细胞株HL60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线；集落培养法观察大黄素对HL60/ADR克隆形成的影响；细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase3酶活性检测、AnnexinVFITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞；RTPCR及yc、Caspase3前体蛋白表达水平的变化。结果表明，大黄素对HL60/ADR细胞增

2、殖具有明显的抑制作用.freelol/L。细胞周期分析显示，与对照组比较，40、80μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高（p0.01），G2/M期细胞比率降低（p0.01），而20μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性（p0.05），各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰（凋亡峰）。大黄素作用12小时HL60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低，AnnexinVFITC/PI法检测到早期凋亡细胞，作用24小时caspase3酶活性显著升高，作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞，细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL60/ADR细胞不同时间段，bc

3、l2、cmycmRNA和Bcl2、cMyc、Caspase3前体蛋白表达水平均有不同程度下调，并呈时间依赖性。结论：大黄素能够有效抑制HL60/ADR细胞增殖，并诱导其凋亡，bcl2、cmyc表达水平下调，线粒体跨膜电位水平降低和caspase3激活可能参与了该过程。【关键词】细胞增殖InhibitoryEffectsofEmodinonDrugresistantHL60/ADRCellProliferationandItsInductionofApoptosisAbstractThestudyedtoinvestigatetheeffectsofemo

4、dinontheproliferationandapoptosisofadriamycinresistantHL60/ADRcells,andtoexploretheunderlyingmechanism.Thecellviabilityandcolonyformationationassayrespectively.Apoptoticcellseansofcellcycleanalysis,mitochondrialtransmembranepotentiallevels,caspase3activitydetection,AnnexinVFITC/PIstainin

5、gandTUNELlabeling.RTPCRycmRNAexpressions.TheproteinexpressionsofBcl2，cMycandcaspase3precursorinedbyyc,caspase3precursorproteinedependentmanneraftertreatmentodinatdifferenttimes.Itisconcludedthatemodinefficientlyinhibitsgroayberelateditochondrialtransmembranepotentialandexpressionsofbc

6、l2andcmyc,asodin;HL60/ADRcell;proliferation;apoptosisJExpHematol2007;15(5):955-960大黄素（emodin），化学名称为6－甲基－1,3,.freelol/L的母液浓度，-20℃保存。细胞生长的MTT法测定HL60/ADR细胞的初浓度为2.0×105/ml，接种于96孔培养板（Costar）。实验组分别含10、20、40μmol/L大黄素，对照组含与最高浓度组等量的DMSO。每组重复3个平行孔，每孔100μl。用药24、48、72、96和120小时后，每孔加入5mg/mlMTT(Sigma公

7、司产品)10μl，继续培养4小时后，小心地吸去上清，每孔加入100μlDMSO，在酶标仪（STATFAX2100型）上充分震荡混匀，进行双波长492nm和630nm比色，测定吸光度值（A值），绘制HL60/ADR细胞增殖曲线。集落形成试验收集细胞接种于24孔培养板（Costar），分为对照组和1.25、2.5、5、10和20μmol/L5种浓度大黄素加药组。每组重复3个平行孔，每孔接种200个细胞，总体积1ml，并含0.7%的甲基纤维素，常规培养10天后倒置显微镜下计算细胞数。大于40个的细胞团为1