运动人体科学基础实验

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1、实验十五血清睾酮与皮质醇（T/C）测定及应用1实验目的⑴通过实验使学生掌握人体激素血皮质醇和睾酮测定方法及意义，为体育教学和运动训练提供指导。⑵进一步巩固离心机、可调微量移液器、振荡器等仪器的基本操作。2实验器材与试剂2实验器材与试剂⑴仪器：芬兰产1470γ计数器、恒温水浴箱等。⑵试剂①血睾酮的测定：使用包被-抗体-计数放射免疫试剂盒，其中包括总睾酮抗体包被试管、125I标记溶液、睾酮溶液和睾酮标准品。②皮质醇的测定：使用包被-抗体-计数放射免疫试剂盒，其中包括总皮质醇抗体包被试管、125I标记皮质醇溶液和皮质醇溶液和皮

2、质醇标准品。③材料：人体静脉血等3实验原理⑴血睾酮的测定原理⑴血睾酮的测定原理放射免疫分析中应用放射性同位素标记物进行检测。其分析的基础是标记抗原（*Ag）和被测抗原即非标记抗原（Ag）限量的特异性抗体（Ab）的竞争性抑制反应，是结合分析中的一类方法。则于标记原和非标记抗原的免疫活性完全相同，因此与特异性抗体具有相同的亲和能力。通常以下列方式表示：在标记抗原和特异性抗体量恒定时，由于标记原抗体复合物的形成受非标记抗原（待测浓度的物质）的含量限制，所以当样品中非标记抗原含量高时，非标记抗原对特异性抗体的竞争能力强，非标志抗原

3、抗体复合物的形成量就多，实验结果所计量到的标记性抗原抗体复合物放射活性就低；相反，样品中非标记抗原含量低时，非标记抗原对特异性抗体的竞争能力弱，非标记抗体复合物形成就少，实验结果所计量到的标记性抗原抗体复合物放射活性就高。其之间形成一定的逆相关函数关系。⑵血清皮质醇的测定原理⑵血清皮质醇的测定原理：放射免疫法（Radioimmunoassay，RIA）测定血清皮质醇浓度的实验方法，测试原理同血清睾酮的测定。4实验方法与步骤4实验方法与步骤㈠血睾酮的测定㈠血睾酮的测定①将包被试管、125I睾酮标记液用标准品处于室温状态，并充

4、分混合标准品，碘标记液（轻轻翻转）。②分取标准液A、B、C、D、E、F各50ul于包被试管中，做双管标准曲线以保证测试数据的准确。③取样品血清50ul，直接滴入包被试管底部。④将1.0ml125I睾酮碘标记加入每个已加入了标准品或测试样品的试管中。在振荡器上振混匀1min。⑤将加入1251标记的试管置于37℃水浴箱中，温育3h。⑥将温育后的溶液全部倒出，在吸水纸上击试管，将管内溶液尽力甩出。⑦按标准管、样品管的顺序依次将试管放入测试架，在γ计数器上进行计数测定。㈡皮质醇的测定㈡皮质醇的测定①将包被试管、125I皮质醇碘标记

5、液及标准品于室温状态下，并充分混合标准品、碘标记液（轻轻翻转）。②分取标准液A、B、C、D、E、F各25μl于包被试管中，做单管标准曲线。③取样品血清25μl，直接滴试管底部。④将1.0ml125I皮质醇碘标记液加入了标准品或样品的试管中，在振荡器上振荡混合1min。⑤将加好碘标记液的试管置于37℃水育箱中，温育45min。⑥将温育后的溶液全部倒出，在吸水纸上叩击试管，将溶液尽力甩干。⑦按标准管-样品管的顺序依次将试管放入测试架，在γ计数器进行测定。⑴血睾酮的测定①采集1ml全血，避免溶血，静置析出或离心后得到澄清的血清，

6、血清量不少于100μl。②向包被试管中加入样品时，吸头不要触及管底部的药膜。③温育时可用小盖子或塑料薄膜纸盖住试管，以防止蒸气形成的水滴掉入试管中。⑵血清皮质醇的测定①血样收服最好为晨静脉血，离心后应达到血清澄清进行测定。②向包被试管中加入样品时，吸头不要触及管底部的药膜。③温育时可用小盖子或塑料薄膜纸盖住试管，以防止蒸气形成的水滴掉入试管中5注意事项5注意事项