出血性脑梗死大鼠脑损伤机制及三磷酸腺苷敏感性钾通道的作用

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1、出血性脑梗死大鼠脑损伤机制及三磷酸腺苷敏感性钾通道的作用【摘要】目的:验证KATP通道是否参与出血性脑梗死的病理过程，探讨HI继发脑损伤的机制.方法:健康雄性SpragueDaorrhagicinfarction,HI）组、单纯脑梗死（cerebralinfarction,CI）组、格列苯脲（Glibenclamide,Gli）干预(Gli+HI,GH)组和假手术(Sham)组.应用两步法建立HI大鼠模型.术后3,6,12,24h进行神经功能评分、脑组织含水量及脑组织三磷酸腺苷酶（adenosinetriphosphatase,ATPase）,琥

2、珀酸脱氢酶（succinicdehydrogenase,SDH）,丙二醛（malondialdehyde,MDA）测定.结果：HI组和CI组大鼠术后各时间点神经功能评分、脑组织含水量差别无统计学意义(P>0.05).HI组大鼠脑组织ATPase活性术后12,24h高于CI组(P<0.05),SDH活性术后24h高于CI组(P<0.05)，MDA含量术后12h低于CI组(P<0.05)；以上现象均可被Gli取消.结论：应用两步法制作的HI大鼠模型较为稳定、可行.CI后继发中等量出血后早期，脑组织对缺血缺氧耐受性增强，延缓了脑损

3、伤，与KATP通道开放有关.【关键词】脑出血脑梗死疾病模型动物三磷酸腺苷敏感性钾通道腺苷三磷酸酶琥珀酸脱氢酶丙二醛0引言脑血管病是导致人类死亡的三大疾病之一，以缺血性脑血管病最常见，约占全部脑血管病的80%，病死率和致残率均高.早期溶栓是急性期脑梗死(cerebralinfarction,CI)有效的治疗方法，部分患者在溶栓治疗后继发脑出血，形成出血性脑梗死(hemorrhagicinfarction,HI)，病理过程较为复杂.我们应用两步法建立HI大鼠模型，对HI和CI早期神经功能缺损、脑水肿及脑组织三磷酸腺苷酶(adenosinetriphos

4、phatase,ATPase),琥珀酸脱氢酶(succinicdehydrogenase,SDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)进行对比研究，并应用三磷酸腺苷敏感性钾通道(adenosinetriphosphatesensitivepotassiumchannels,KATP通道)抑制剂格列苯脲(Glibenclamide,Gli)进行干预，验证KATP通道是否参与HI的病理过程，对HI的病理机制进行初步探讨.1材料和方法1.1材料立体定向仪（SR6N,Japan）；ANDHR120电子天平（日本，精确度为0.1mg）；恒温

5、干燥箱（北京市朝阳区来广营医疗器械厂）；3034A型隔水式培养箱（南通科学仪器厂）；-80℃冰箱（日本）；玻璃匀浆器；721分光光度计；手术相关器械；自制行为学评分器械；三磷酸腺苷酶测试盒、琥珀酸脱氢酶测试盒及考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；格列苯脲（Sigma）;液氮及各种实验室常用试剂.1.2方法1.2.1实验动物与分组成年健康雄性SpragueDa)组.每组按时间分为术后3，6，12，24h共4个亚组，每个亚组6只大鼠.1.2.2动物模型的建立应用本实验室的两步法制作HI大鼠模型：大鼠称质量后麻醉.第一步，参照Long

6、a等［1］和Laing等［2］的线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞（middlecerebralocclusion，MCAO）模型.①大鼠仰卧位固定于手术台，取颈部正中切口约3cm.暴露右侧颈总动脉（moncarotidartery，CCA）,颈外动脉（externalcarotidartery，ECA）和颈内动脉（internalcarotidartery，ICA）.②结扎、离断ECA的分支，在距CCA分叉3～4mm处结扎并离断ECA.③在ECA残端剪一0.2mm的小口，将制备好的线栓（直径0.235mm，头端呈球形）插入，并沿ICA插入颅内，进线

7、长度距CCA分叉处(18.5±0.5)mm，进线有轻微阻力感时停止.结扎、剪断线栓尾端部分，常规逐层缝合切口.第二步，参照Hua等［3］及本实验室改良的方法［4］，将50μL自体尾动脉血注入尾状核部位.①MCAO造模成功后，随即将大鼠固定于立体定向仪，暴露Bregma点.②取Bregma点右侧中线旁3mm,向前1mm，用牙科钻钻一直径1mm的圆孔，深度达硬脑膜.③将大鼠双下肢翻转朝上固定，在尾根部腹侧面作一约2～3cm的纵形切口，暴露尾动脉.用生理盐水冲洗过的微量注射器抽取不加抗凝剂的尾动脉血50μL.④迅速将微量注射器固定于事先调整好的立体定向仪

8、上，进针深度距骨面6.5mm，缓慢注入血液（注射时间2min），注射完毕留针10min.医用骨蜡封闭钻孔，常规缝合头部皮肤