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1、超高分子聚乙烯颗粒对体外培养成骨细胞活性的影响论文刘林许铁秦宏敏韩会峰【摘要】目的建立小鼠胚胎成骨细胞和超高分子聚乙烯（UHMethodsTheexperimentbryonicmouseosteoblastsediumafterthecellsbeganadheringtothevesseli-quantitativeRT-PCRandEM、胰蛋白酶、PBS缓冲液、青霉素、链霉素等常规实验耗材(南京基天)，AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒（ACTGene），rnagents总RNA提取系统（Promega），RT-PCR检测
2、系统（Promega），Cbfα1（SantaCruz公司），辣根过氧化物酶结合的二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司）。1.2实验方法1.2.1颗粒内毒素的处理将获得的UHMEM培养液中（全培）,.freell冷的PBS液洗涤2次，1000g×10min离心，弃上清液，调整待测细胞的密度为5×105～1×106个/ml；将细胞重悬于500μlBindingBuffer中，同时设立调零组。向每管加入20μlAnnexinV-FITC和5μl溴化吡啶，轻轻混匀，室温避光反应5min，上机检测。实验操作重复3次。1.2.5总RNA的提取、RT-
3、PCR和琼脂糖凝胶电泳分别在细胞培养的第3、5、7天弃掉UHMg2+115mmol/L（具体反应条件见表1）。正常成骨细胞为阴性对照，所有的实验组与对照组重复3次。PCR结束后经2%的琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色后拍照，然后进行灰度分析（ImageJ图像分析软件）并绘制灰度值柱形图。表1Cbfα1、GAPDHRT-PCR反应条件1.2.6echanismandclinicalsignificanceofechanismsofosteoclastformationandboneresorptioninperiprostheticosteol
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